摘要：目的　了解中国人类嗜T细胞病毒Ⅰ型 (HTLV Ⅰ )的基因特点 ,寻找其传播及流行的原因 ,为进行HTLV Ⅰ诊断试剂及疫苗的研制等提供基础资料。方法　设计 2 2条引物 ,用PCR扩增出中国HTLV I汕头株 (命名为HTLV ⅠWHP)的前病毒基因进行测序、分析。结果　获得HTLV ⅠWHP前病毒的核苷酸全序列 ,共 90 3 4bp。将HTLV ⅠWHP与HTLV Ⅰ的原型ATK进行比较 ,其LTR、gag、pol、env、tax、rex区的核苷酸变异率分别为 :2 .4 %、1 .2 %、1 .1 %、2 .0 %、0 .1 9%、0 .79%。进化树的分析结果表明 ,HTLV ⅠWHP与来自日本、加勒比海、台湾以及金门岛的部分毒株最接近 ,同属于世界群a亚型。结论　HTLV ⅠWHP基因结构保守 ,来自于亚洲东北部沿海地区的HTLV Ⅰ毒株可能具有共同的起源。

摘要：目的　为阐明TT病毒(TTV)流行病学特征和基因组异质性以及为血清学诊断试剂的研制提供资料。方法　从健康查体者的血清中提取DNA,设计一套引物,采用套式聚合酶链反应(nestedPCR),检测TTV,对其中7例阳性标本进行了克隆测序,并与2株日本株TTV的核苷酸序列作了比较。结果　111例正常人中TTV的感染率为126%。7株中国株TTV间的核苷酸同源性为906%～954%,与日本株TX011(O)的核苷酸同源性930%～950%,而与日本株TA278同源性则在729%～747%之间。所推测的7株中国株TTV间氨基酸同源性为819%～994%,与日本株TX011(O)氨基酸同源性为855%～886%,而与日本株TA278氨基酸的同源性仅为681%～717%。结论　正常人群中TTV的携带率比较高。7株中国株TTV变异相对较小,同源性比较高,与日本株TX011(O)属于同一基因型。氨基酸的变异大于核苷酸变异。

摘要：以网状内皮组织增生症病毒(REV)中国分离株HA9901感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA作为其前病毒基因组模板,根据已发表序列设计合成6对引物,经PCR扩增出6段连续的、相互部分重叠的DNA片段和闭合环形前病毒两末端LTR的连接区段,并分别连入T载体进行克隆、测序.用DNAstar软件对测序结果进行剪辑和拼接,完成了REV第一个中国分离株HA9901前病毒全基因组核苷酸序列.在从截然不同的地区、不同年份、不同禽类分离到的毒株中,将该序列与另两个毒株已完成的全基因组序列的比较表明,REV的整个基因组相对保守,各毒株间对应基因的同源性都在92%以上.其中,从我国鸡体分离到的野毒株HA9901与美国鸡源分离株FA在整个基因组上的同源性均显著高于美国的鸭源SNV株.

摘要：目的对肾综合征出血热灭活疫苗毒株84Fli株的M和S基因进行核苷酸序列分析,了解该毒种的基因稳定性。方法根据汉坦病毒标准株设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增疫苗株84FLi株的M和S基因片段,PCR产物纯化后直接测序,并进行遗传进化分析。结果疫苗株84FLi株M基因片段的核苷酸序列与GenBank中收录的HTN型毒株的M基因核苷酸序列的同源性为83.5%～99.9%,而与SEO型毒株的同源性为70.2%～72.0%。其S基因与HTN型毒株的同源性为85.9%～99.6%,与SEO型毒株的同源性为69.4%～70.8%。疫苗株84FLi株的M和S基因的氨基酸序列与GenBank中收录的HTN型汉坦病毒84FLi株M和S基因的氨基酸序列的同源性分别为99.9%和99.5%。从遗传进化树上可以看出,疫苗株84FLi株与GenBank中收录的84FLi株位于一个独立的分支上,与其他HTN型病毒亚型分布于不同分支上,与其他HTN型病毒亚型亲缘关系较远。结论肾综合征出血热灭活疫苗毒株84FLi株M和S基因片段的核苷酸和氨基酸序列未发生较大变异,说明在传代过程中该疫苗株在基因水平上并未发生较大改变。

摘要：用ＰＣＲ方法，将苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ａｇ菌株（ＢａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｋｅｎｙａｅＡｇ，简称Ｂｔｋｅｎ－Ａｇ）编码ｃｒｙ１Ａｃ杀虫毒素蛋白的Ｎ末端（１．８４ｋｂ）的基因片段扩增后，用ＥｃｏＲⅠ消化成三个不同大小的片段，将原扩增片段及酶切片段分别连接到ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ克隆载体后转化进大肠杆菌，将每一克隆片段进行序列测定，在此基础上又设计出特异引物，再次以ｃｒｙ１Ａｃ的ＰＣＲ产物为模板分别对两条链进行精确测序．并与已发表的肯尼亚亚种ＨＤ５８８－２菌株、库斯塔克亚种的ＨＤ－１和ＨＤ－７３菌株的ｃｒｙ１Ａｃ基因序列进行了比较．

摘要：目的 :了解长沙地区献血员输血传播病毒 (TTV)感染情况 ,初步探讨该病毒感染与肝炎的关系。方法 :根据己报道的TTV基因保守序列 ,设计两对引物以套式聚合酶链反应 (nested PCR)对 1 82份献血员血清标本进行TTVDNA检测。结果 :45份单纯ALT升高血清标本TTV阳性 1 6例 (3 5 6%) ,1 2 9份ALT正常血清标本TTV阳性 2 1例 (1 6 3 %)。ALT升高组TTVDNA的阳性率明显高于ALT正常组 (x2 =7 40 ,P <0 0 5)。序列分析结果显示 ,献血员TTV分离株相应位置核苷酸序列与日本株和中国株的同源性≥ 97 1 %。结论 :长沙地区献血员中TTV感染率较高 ,TTV感染与肝炎密切相关 ;长沙地区分离的TTV可能与日本株AB0 0 83 94和中国株AF0 791 73属同一基因型。

摘要：VP1基因的遗传衍化关系是口蹄疫病毒分型的依据,而且许多重要的抗原位点也都位于VP1蛋白上。为了对南非2型口蹄疫病毒(SAT2-FMDV)VP1的编码基因序列及其氨基酸序列进行分析,为南非2型口蹄疫的诊断及疫苗设计提供理论基础,试验从NCBI下载大量的南非1/2/3型口蹄疫病毒(SAT1/2/3-FMDV)的1D2A2B基因片段,通过序列分析选择相似性较低的序列代表SAT1/2/3,将选中的代表序列连接于p UC57载体上进行合成,再对合成的含目的序列的穿刺菌进行划板、挑单克隆、摇菌、提质粒,得到重组质粒初步进行酶切鉴定后进行测序,测序正确后采用DNAStar软件包对这些合成序列进行分析。结果表明:SAT2-FMDV VP1的编码基因核苷酸序列变异度较大;虽然SAT2口蹄疫病毒VP1蛋白上主要抗原位点位置与其他血清型的差异性并不大,但是关键氨基酸已发生变化。

摘要：本实验从我国自己分离的白喉杆菌噬菌体中成功地克隆了白喉毒素的全基因。此基因克隆是以自己设计合成的寡核苷酸为引物，以Ｂ棒状噬菌体ＤＮＡ为模板，用热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）一次扩增出全基因编码序列。该基因全长共１６０５个碱基对。将ＰＣＲ产物直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ／载体系统，经有关限制性内切酶消化，核苷酸序列分析并与已知序列比较，结果表明，所获白喉毒素基因的序列与已知序列基本一致，仅有个别碱基位点的差异。该研究为在我国开展白喉毒纱基因工程疫苗及其相关的融合蛋白的研究奠定了必备的基础。

摘要：从本院分离的辣椒温和斑点病毒株系PMMV-QD中提取RNA。根据已有报道的外壳蛋白(CP)自行设计引物P1、P2,用RT-PCR扩增PMMV-QD的CP基因的cDNA,插入pMD18-T载体,转化感受态受体菌XL1-Blue,以蓝白菌落筛选转化株,用PCR检测白色菌落,确认获得了含cDNA的阳性重组子。序列测定和比较的结果表明该片段确含有PMMV的CP基因编码区,此种cDNA与国外报道的PMMV病毒株系核苷酸序列的同源性达到97.7%。

摘要：参照已发表的捻转血矛线虫H11蛋白基因序列设计引物,以***株的总RNA为模板,进行RT2PCR扩增,成功扩增出H11基因。将PCR产物与pUCm2T载体连接后,转化DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并测序。序列分析表明,其核苷酸序列与国外报道的H11基因的同源性为99.5%。编码氨基酸序列具有氨基肽酶的保守序列,推测可使虫体不能获得所必需的氨基酸而导致死亡。