摘要：目的克隆并鉴定乙型肝炎病毒表面抗原基因,为下一步构建该重组腺病毒载体以及进一步研究腺病毒载体的包装及在乙型肝炎病毒基因治疗中的作用。方法参照人 HBV adr 亚型序列,设计和合成 S 基因特异引物。应用 PCR 技术,从含有 HBsAg 的 HBV DNA 中扩增目的 DNA,通过 TA 连接将其克隆人 pGEM-T easy 载体,经限制性内切酶 BglⅡ/SalⅠ鉴定后,进一步测序鉴定。结果从乙肝表面抗原阳性(HBsAg+)血清中成功提取 HBV DNA,并以此 DNA 为模板,成功扩增出 S 基因,测序结果与 GenBank 中注册的相应序列比对,核苷酸序列的同源性高达92％～99％,预测氨基酸序列同源性亦达82％。结论从 HBsAg 阳性血清中成功克隆出 S 基因序列,为进一步构建重组腺病毒及后续实验奠定了基础。

摘要：目的采用逆转录-聚合酶链反应-序列分析方法,对脑炎与非脑炎手足口病患儿粪便和脑脊液样本中肠道病毒71型(EV71)部分VP1区进行核苷酸和氨基酸序列比对,探讨核苷酸或氨基酸变异与不同临床类型的关系。方法以临床诊断和基因诊断方法确定手足口病和EV71感染,用自行设计的2对引物,在EV71 VP1区扩增核苷酸,连接T载体后进行序列分析。所得序列连接后与EV71各亚型和安徽阜阳流行株核苷酸序列,通过DNAMAN和BI-OEDIT软件比对,分析其基因特征,并构建系统发生树。结果 6个不同临床类型手足口病病人核苷酸序列与A型、B型、C型的同源性分别为82.2%～82.6%、82.9%～84.1%和89.1%～95.1%,其中与C4亚型同源性最高,为94.8%～95.1%,与安徽阜阳地区流行株的同源性在98.0%～98.4%之间;与安徽阜阳株氨基酸序列比对,同源性在99.3%～99.6%之间,且均在563位由I(异亮氨酸)变为T(苏氨酸),仅有1例脑炎病人zxuan_VP1_2438-3260(脑脊液)在584位A(丙氨酸)变为G(甘氨酸),1例HFMD病人A06_***1_2438-3227(粪便)在736位由W(色氨酸)变为C(半胱氨酸),余未出现特征性改变。结论神经源性肺水肿、脑炎与非脑炎手足口病患儿分离株EV71 VP1区核苷酸序列和推导的氨基酸序列无特征性差异。

摘要：本文研究探讨了用于扩增粘菌rDNA ITS区的引物,自设计了一对新引物,命名为MYITS5和MYITS4(其中MY代表Myxomycetes),引物序列为:MYITS5为5′GGAAGCA-GAAGTCGTAACAAGG3′(Tm=66)和MYITS4为5′TCCTCCGCTGACTAATATGC3′(T_m=60).该引物成功地扩增了粘菌4个目5个种的5份材料,即无丝菌目线膜菌科粉瘤菌属(Lycogala)的粉瘤菌(***)和大粉瘤菌(***),团毛菌目团毛菌科团毛菌属(Trichia)的网孢团毛菌(***),绒泡菌目绒泡菌科绒泡菌属(Physarum)的两瓣绒泡菌(***),发网菌目发网菌科发网菌属(Stemonitis)的美发网菌(***).扩增片段的长度分别为:粉瘤菌约为450bP和245bP,大粉瘤菌约为495bP.美发网菌约为610bp,网孢团毛菌约为585bp,两瓣绒泡菌约为1020bp.这表明粘菌各主要类群(无丝菌目、团毛菌目、绒泡菌目、发网菌目)的rDNA ITS区的核苷酸序列存在明显的变异.产生这种变异的原因可能是由于各类群在进化过程中,在ITS区出现核苷酸片段的缺失或插入造成的.另外,两瓣绒泡菌的扩增片段长度约为1020bP,这与已知序列的多头绒泡菌的ITS区长度(约1000bp)相近,表明该引物的设计是合适的.同时,本文的研究也为粘菌分子生物学和系统学的研究开辟了一条新途径.

摘要：参照Digby发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列，设计一对引物，应用RT-PCR．技术，从ConA诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性地扩增出大小约为500bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序，结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100％。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达载体pGEX-CHIFN-1，并将其导入大肠杆菌BL21中，诱导表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析，分子量约为43ku，表明所克隆的CHIFN-γ基因在原核细胞中得到了表达。

摘要：背景:流感病毒常年在儿童和老年人中发病并引起死亡。诊断流感不仅靠临床表现,还有靠实验室的快速诊断。目的:此研究应用RT-PCR方法从临床标本中快速检测出流感病毒(甲、乙型)。为决定灵敏度和特异度,在方法中特设实时荧光。研究设计:为了鉴定和识别甲型和乙型流感病毒,在荧光共振能量传输(FRET)技术的基础上,利用双向探针系统。根据佛罗里达州流感网络监测点人员的建议,本次试验供选择了58件标本。

摘要：根据GenBank中登录的禽白血病病毒A、B、J亚群的核苷酸序列设计合成了3对引物，各对引物可分别扩增出大小约为195、260、924bp的核苷酸片段：经优化建立禽白血病病毒多重PCR检测法，并进行其敏感性试验及对马立克病病毒（MDV）、

摘要：SACⅡB2是我室在SRS-82细胞系基础上建立的小鼠淋巴瘤克隆细胞株。应用免疫组织化学方法对SACⅡB2的癌基因表达产物进行筛选，发现c-fos呈高强度表达。设计同小鼠c-fos的mRNA第2～7个编码子共18个核苷酸序列互补的反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotidc，AS-ODN)，

摘要：本发明提供一种同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒的方法，属植物保护领域。根据烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒核苷酸序列分别设计两对特异性引物TB2F／TB2R（检测烟草丛顶病毒）及TVCPF／TVCPR（检测烟草扭脉病毒）。提取植株组织的总RNA后，采用双重RT—PCR的方法，同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术以及总核酸提取法和传统RT—PCR方法的缺点，只用相当于一次普通RT—PCR的时间和试剂，就可以方便、特异、灵敏的同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。