摘要：许多疾病的特征在于各种生物分子表现出的异常活性,这些物质通常在细胞内外显示过表达现象,因此对其灵敏靶向识别可以提供诊断和治疗效用。由于基因诊疗和化学传感技术的发展,用于灵敏检测细胞内外生物化学物质的核酸探针突显优势。核酸探针可以在稳定进入细胞的同时,特异性地结合目标物质,通过光学方法检测或通过成像技术标识出来。本文综述了采用光学传感方法和成像技术,基于核酸探针检测生物分子的新进展。根据检测对象进行分类,概括分析了几个代表性体系:核酸序列、蛋白质和酶、化学物质和物理化学条件,并详细阐述其关键设计原理、灵敏度及样品检测等结果,同时指出了各类核酸探针的优缺点。

摘要：试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针,一条探针5'端修饰生物素,另一条探针3'端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳米金颗粒上。靶核酸两端分别与两条探针结合,形成"生物素化探针-靶核酸-纳米金探针"复合物,该复合物通过生物素-亲和素系统,固定在固相载体上,最后银染放大信号。通过肉眼观察法、光镜观察法、分光光度法分析银染灰度,从而间接测定靶核酸的量。初步检测PPRV核酸最低浓度达10fmol/L,所需时间约为1.5h。该方法灵敏度高、操作简单,为临床检测小反刍兽疫病毒核酸提供实验数据和技术支持。

摘要：本课题建立了地高辛标记核酸探针检测牛病毒性腹泻 -粘膜病病毒 ( BVDV)的诊断方法。根据 BVDV基因序列的结构特点 ,在编码非结构蛋白 p1 2 5高度保守基因区内 ,设计合成一对特异性引物。以 PCR技术从 BVDV基因重组质粒中扩增出了 BVDV特异的、保守的 40 0 bp核苷酸片段 ,经纯化后 ,地高辛标记 ,制备牛病毒性腹泻病毒的特异性核酸探针。通过检测 BVDV细胞培养物、相关病毒及核酸载体和 BVDV细胞培养物的总 RNA、反转录产物及 RT- PCR产物 ,结果证明 ,该探针特异性强、敏感性高 ,适于病毒反转录产物的检测。本试验用所制备的核酸探针对某奶牛场的腹泻犊牛粪便进行了 BVD的临床诊断的初步应用试验。

摘要：近年来核酸探针作为一种基因诊断技术逐渐被人们接受,综述了核酸探针的设计原理、制作方法及其在生物领域中的应用,为中学生物学教学提供参考。

摘要：根据犬瘟热病毒(CDV)基因序列的结构特点,在其编码核衣壳蛋白的高度保守基因区内,设计合成一对特异性引物。以RT-PCR技术从CDV基因中扩增出了一段长度为430 bp的核苷酸cDNA,并制备出地高辛标记的CDV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与CDV标准株和地方分离株核酸发生特异性杂交,而与对照的NDV、MV等病毒的核酸杂交反应均为阴性。敏感性检测结果表明,该探针对CDV的检出量可达到0.1 pg。用所制备的核酸探针对某宠物诊所疑似犬瘟热病例进行临床诊断初步应用试验,表明该标记探针完全可用于CDV的临床检测。

摘要：经基因库序列比对确定花生白藜芦醇合酶基因(RS)中的特异序列(长度约108 bp)。以此为模板设计分别含有SalI和SacI酶切位点的一对上、下游引物,并应用二温式PCR扩增得到该特异短片段。将该特异片段正向连接到pBlueskriptIIKS(+)的多克隆位点上,利用T7 RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记的反义特异短核酸探针。该特异短核酸探针的合成为后续RS基因在花生组织器官中表达的RNA原位杂交研究打下了基础。

摘要：从感染斑节对虾杆状病毒（MBV）的斑节对虾仔虾肝胰腺中纯化MBV，经抽提后以之为模板进行聚合酶链反应（PCR），引物根据苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcNPV）多角体蛋白基因序列的高度保守区设计并合成．PCR扩增得到650b单一核苷酸片段．PCR产物部分序列分析表明此PCR产物与AcNPV多角体蛋白基因序列有约60％的同源性．以此650pDNA片段为探针作打点杂交，探针能与受MBV感染的斑节对虾肝胰腺和消化道中抽提的总DNA杂交，不能与其它组织中抽提的总DNA杂交．应用PCR方法检测MBV的组织特异性，得出与打点杂交相同的结果；检测斑节对虾各生长阶段及卤虫感染MBV情况，认为MBV可能为水平传播；PCR检测方法与组织学方法比较，认为前者更加敏感．

摘要：根据Pg的特异的fimA基因设计一对引物,采用PCR技术扩增其中542bp长的DNA片段,用^(32)P标记作为探针与25株细菌DNA进行杂交鉴定.结果显示该探针能识别5株同种菌,而与其它20株异种菌DNA无阳性信号出现,探针的敏感性达到微微克级.提示该探针具有特异、敏感、快速、简便的特性.适用于对Pg的检测.

摘要：根据禽呼肠孤病毒 (ARV )参考毒株S1 1 3 3S1基因序列 ,设计合成 4对引物而分别建立了RT -PCR、半套式PCR和一步法PCR三种用于检测ARV的方法。它们能检测到的最近ARVRNA量分别为 1pg、1fg和 0 1 6ngRNA ;研制出禽呼肠孤病毒地高辛核酸探针 ,并建立了地高辛核酸探针检测ARV的方法 ,该核酸探针最低能检测到 0 45ng的ARVRNA ;对广西部分鸡场血清学调查表明 ,ARV平均阳性率为 2 7% ;对广西ARV野毒株进行了分离和鉴定 ,并对获得的 2个地方分离株的S1基因片段进行测序及分析 ,两分离株与标准株S1 1 3 3的同源性分别为98 5 %和 98 3 % ;用所建立的RT -PCR和地高辛核酸探针方法对用ARV人工感染鸡采集的各种样品的检测 ,并和传统病原分离方法进行比较 ,结果RT -PCR检出率为 92 5 % ( 2 2 2 /2 40 ) ,地高辛核酸探针检出率为 74 2 % ( 1 78/2 40 ) ,病原分离鉴定方法检出率为 5 5 % ( 1 3 2 /2 40 )。用ARV强毒分别对免疫种鸡后代和无母源抗体或SPF的雏鸡进行攻毒试验 ,结果油苗免疫的种鸡后代对本病有很强的抵抗力 ,能抵抗ARV强毒的攻击 ,其平均保护率 90 8% ( 1 0 9/1 2 0 )。而无母源抗体或SPF的雏鸡攻毒后均 1 0 0 % ( 2 40 /2 40 )死亡。

摘要：建立应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针杂交。检测真菌的方法 ,并比较二者检测临床常见医学真菌的敏感性。设计并合成医学真菌通用引物 ,用PCR扩增白色念珠菌标准株的核糖体RNA基因 ,用长臂光敏生物素或光敏地高辛标记其纯化的扩增产物制备成相应的核酸探针 ,然后用上述两种探针对标本中的PCR扩增产物进行Southern杂交 ,检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染大鼠 ,建立念珠菌病的实验动物模型 ,验证血培养法、PCR法和PCR扩增结合Southern杂交 ,检测真菌的敏感性。结果表明 ,这两种核酸探针可分别与白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等 9种真菌杂交呈阳性结果 ;与临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA杂交结果为阴性。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增结合长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度 ,实验证明后者的敏感性最高。总之 ,应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针与标本PCR扩增物杂交 ,检测上述真菌既特异和敏感 ,又不需放射性同位素。光敏地高辛核酸探针检测医学真菌的灵敏度略高于长臂光敏生物素核酸探针。