摘要：桑花叶萎缩类病毒(Mulberry mosaic dwarf viroid,MMDVd)基因组由单链环状小分子RNA组成,根据预测二级结构可能存在锤头核酶(Hammerhead ribozyme,HH)和疑似发夹核酶(Hairpin ribozyme,HP),但目前还缺乏对核酶活性的研究。本研究使用体外自切割和2,3-环磷酸基测序对核酶活性及自切割位点进行了鉴定,并在发夹核酶Loop1增加一对碱基设计合成了突变核酶MMDVd-HP’,比较了其与MMDVd-HP的活性差异,分析了MMDVd对正常未染病和桑花叶卷叶病相关病毒(Mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRaV)阳性桑树的侵染。体外自切割结果显示,所有核酶均成功自切割产生了相应的单体,均有核酶活性。2,3-环磷酸基测序结果显示,腺苷化接头分别连接于第7位的C和302位的A之后,MMDVd-HH的切割位点位于AUC↑处,MMDVd-HP切割位点位于ACA↓处。定量PCR结果显示反应体系中的MMDVd-HP多于MMDVd-HP’,表明MMDVd-HP’更多的发生了切割,活性高于MMDVd-HP。侵染性实验结果显示,桑树(-)没有检测到MMDVd,而所有桑树(MMLRaV)样本均检测到了MMDVd,说明MMDVd能侵染桑树(MMLRaV),与satRNA的特征相似。

摘要：为建立一种快速、灵敏、简单的检测类病毒的方法,以桑花叶萎缩类病毒为研究对象,根据其基因组设计了1条特异性连接环化的寡核苷酸链探针和2条PCR扩增检测引物,对收集到的6份桑花叶型萎缩类病毒样品进行了滚环扩增。结果所有样品的RCA扩增产物的核酸电泳,条带呈阶梯状分布,但大部分聚集于上样孔附近,与理论分析相符,表明该方法适用于桑花叶萎缩类病毒的快速检测。进一步利用人工合成的模拟DNA分子测试该检测方法的灵敏度,研究显示,利用RCA技术可以成功检测到10~3拷贝的模式DNA分子。

摘要：为调查桑花叶萎缩类病毒的多态性,通过RT-PCR技术分离了安康地区桑花叶型萎缩类病毒,并对其基因组进行了克隆测序和序列分析。结果获得4个MMDVd变体,核苷酸长度为356 nt或357 nt,GC含量均约51%,Mfold网站预测二级结构两端为分枝状结构,其中约有58%的碱基配对。

摘要：桑花叶萎缩病是危害桑树的主要病害之一,其病原物为类病毒(viroid)。以感染桑花叶萎缩病的桑树植株茎尖为外植体繁育无毒桑苗,可以有效控制该病的蔓延。通过正交试验对启动培养基中植物激素的添加浓度进行优化,筛选出最适合外植体生长的培养基配方为MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT+0.1%PVP-40,最适合外植体生根的培养基配方为1/2MS+0.25 mg/L 2,4-D+0.1%PVP-40。根据已报道的桑花叶萎缩类病毒的核苷酸序列设计引物,对组培桑苗叶片cDNA进行RT-PCR扩增,所有样品中均没有检测到桑花叶萎缩类病毒特异条带。试验结果表明,以感染桑花叶萎缩病的桑树茎尖为外植体,通过组织培养方法可以获得健康的脱毒苗。

摘要：引物特异反转录结合实时荧光定量PCR技术对MMDVd在寄主和非寄主植物体内正负链的积累差异进行了研究。根据MMDVd基因组序列,设计了3对反向互补的反转录引物,对桑树和拟南芥中的MMDVd的正负链进行引物特异的反转录,荧光定量PCR技术对纯化后的c DNA进行定量分析。分析表明,桑树中,3组反转录引物的结果都是负链高于正链,为2~9倍,而拟南芥中,正负链的比例不定,显示了较高的随机性。本研究可为进一步的类病毒的侵染机制及其寄主域的研究提供参考。