摘要：CRISPR/Cas9技术是在特定的RNA引导下,利用特异的核酸酶实现对基因组进行编辑的新技术。自2013年该技术体系建立起来已成功应用于动物、植物及真菌中。本文简述了3种基于核酸酶的基因编辑技术及其应用,概述了CRISPR/Cas9系统的组成及其作用机理,总结了CRISPR/Cas9在模式真菌酿酒酵母及丝状真菌中的应用,并就在丝状真菌中应用该技术时sg RNA表达盒的设计、Cas9表达盒的优化、抗性标记的筛选、受体的选择等方面提出具体的研究方法。另外,针对该技术应用过程中出现的脱靶效应、Cas9核定位信号的添加、启动子的选择及多个靶基因的编辑等问题提出了建议与展望,希望能够为初次涉足该领域的科研人员提供理论参考和技术支持。

摘要：通过保守的寡核苷酸引物B1/B3扩增出油菜菌核病菌MBCHR和MBCS菌株的部分β-微管蛋白基因,结果发现编码的198位氨基酸由Glu(GAG)突变为Ala(GCG),表现高水平抗药性。根据MBCHR菌株的突变设计2个快速检测方法:第一种方法是根据MBCHR菌株197和198位密码子(GACGAG→GACGCG)形成ThaI酶切位点(3’CGCG 5’),将B1/B3的扩增产物874bp片段酶切成193bp和681bp片段,而MBCS菌株的PCR产物不被酶切;第二种方法用198位突变密码子作为3’末端碱基设计2个等位基因特异性寡核苷酸引物(ASO)用于“nested”PCR或直接从基因组DNA扩增。通过PCR扩增和ThaI酶切能直接检测油菜菌核病菌的MBCHR和MBCS菌株,所得结果与传统菌落直径法相吻合。

摘要：目的分离鉴定一株红树林来源具有拮抗真菌活性的链霉菌MCCG 2008,分析其对植物病原真菌香蕉尖孢镰刀菌热带4号小种(Fusarium oxysporum *** tropical race 4)、苹果链格孢菌(Alternaria alstroemeriae)、珍珠李葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)和芒果炭疽菌(Colletotrichum fructicola)的抑制作用,对其所产的抑菌活性化合物进行了分离纯化,并通过基因扩增测序分析与活性化合物生产相关的生物合成基因簇,为进一步调控活性化合物的生产以及结构优化提供依据。方法通过形态观察、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析对MCCG 2008进行初步鉴定;通过发酵液原液、发酵液乙酸乙酯粗提取物和菌丝体丙酮浸提物针对不同植物病原真菌进行了活性测试与效用组成分析;采用液液萃取和柱色谱分离该菌株所产生的具有抑菌活性的次级代谢产物,通过高效液相色谱质谱联用仪和核磁共振仪对活性化合物结构进行解析;设计引物使用PCR扩增该菌中与活性化合物生物合成相关的基因。结果菌株MCCG 2008可形成茂盛的气生菌丝,并产生黄色的可扩散色素,16S rRNA基因序列系统发育分析显示菌株MCCG 2008与微小链霉菌Streptomyces parvulus NBRC 13193T的相似度为100%;在拮抗活性试验中,菌株MCCG 2008对珍珠李葡萄座腔菌的抑制活性最强,抑制率为48.0%,其发酵液乙酸乙酯粗提物和菌丝体丙酮浸提物仅对香蕉尖孢镰刀菌热带4号小种有抑制活性;质谱(MS)和核磁(1H NMR)数据分析表明从菌株MCCG 2008的发酵液中分离得到的活性化合物为放线菌素D;以放线菌素D生产菌为参照,通过序列比对发现MCCG 2008中的同源序列,并通过PCR扩增获得菌株MCCG 2008基因组中与放线菌素D生物合成相关的基因。结论分离自广西红树林根际土壤的链霉菌MCCG 2008初步鉴定为微小链霉菌,其具有拮抗植物病原真菌的生防潜力,所产的活性化合物为放线菌素D。

摘要：对花椒总多酚的提取工艺进行优化并测定了花椒多酚对植物病原真菌的抑制活性。在单因素实验基础上,选用料液比、乙醇浓度、微波时间,以总多酚含量为响应值,进行Box-Behnken设计和优化。结果表明:采用80~100目的花椒,在料液比为1∶40(g/mL)、乙醇浓度为60%、微波功率为616 W、微波提取时间为60 s的条件下,提取出的总多酚含量为63.11 mg/g。用生长速率法分别测定花椒总多酚提取物对小麦赤霉、玉米小斑、番茄灰霉、油菜菌核、柑橘绿霉、葡萄白腐菌、马铃薯晚疫病菌7种植物真菌的抑制作用,其抑菌率分别为20.14%、2.40%、73.82%、7.60%、0.00%、19.80%、10.06%,其中花椒总多酚提取物对番茄灰霉菌的抑制作用最佳,且浓度与药效间存在着显著的相关性,EC 50值为31.91 mg/L,其相关系数为0.9539。经卡方(X^(2)=0.294,df=3,P>0.05)检验其结果可靠,说明花椒多酚提取物对番茄灰霉菌有良好的抑制作用,为花椒的用途扩展提供了新的理论依据。

摘要：[目的]以取代苯胺为起始原料,设计并合成了16种2,4-二甲氧基喹啉类化合物,在表征这些化合物结构的基础上,考查了其体外抗真菌活性。[方法]先采用^(1)H NMR和^(13)C NMR谱确认了目标化合物的结构;再以醚菌酯为阳性对照,在50 mg/L质量浓度下,采用菌丝线性生长速率法测定了所有化合物对13种常见植物病原真菌的体外抑制活性。[结果]抑菌试验结果表明:所有化合物对供试病原菌具有不同程度的抑制活性,化合物C2和C15的活性最高;C2对12种供试菌的抑制率均高于醚菌酯,对苹果腐烂病菌、白菜黑斑病菌和马铃薯干腐病菌的抑制率高达100%。[结论]对供试化合物的抑菌活性进行初步分析,发现在2,4-二甲氧基喹啉6位引入卤素原子,相应化合物的抑菌活性显著提高,以上研究结果为喹啉类抗菌剂的研发奠定了理论基础。

摘要：稻瘟病菌引起的稻瘟病是水稻严重的毁灭性病害。日前,南京农业大学植保学院张正光课题组揭示了组蛋白乙酰转移酶介导细胞自噬控制稻瘟病菌致病的机制,首次发现了组蛋白乙酰转移酶MoHat1磷酸化/去磷酸化决定其胞内定位,并解析了其在细胞质中发挥作用的生化机制,拓展了人们对植物病原真菌攻击寄主的认识,有助于认识稻瘟病原菌的致病机理,同时可望为设计高效、低毒的稻瘟病控制策略提供参考。