摘要：为建立稳定有效检测miR-34c的实时荧光定量技术体系,采用茎环结构法设计了反转录引物,并通过梯度浓度及梯度温度PCR法对miR-34c的最佳退火延伸温度和模板浓度进行了确定,最后通过实时荧光定量PCR对miR-34c进行检测。试验成功建立了精确检测miR-34c的实时荧光定量技术体系,其中miR-34c最佳退火延伸温度为62.4℃及每个实时定量反应体系中cDNA对应的RNA量最适浓度为50ng/μL,并得到重复性高、特异性强的检测结果。该技术体系的建立不仅为检测miR-34c提供了精准便捷的方法,而且可为设计检测其他miRNA提供技术支持。

摘要：目的 :建立实时定量聚合酶链反应 (RQ PCR)检测心血管活性多肽的方法 ,为快速、准确地分析心脏组织中apelin基因表达奠定基础。方法 :根据心血管活性多肽apelin基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记TaqMan探针。将逆转录 聚合酶链式反应扩增的apelin基因片段克隆至pGEM Teasy载体 ,重组质粒经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后 ,作为阳性克隆标准品 ,用于标准曲线的制定 ,由此可定量检测出每一样品模板的起始拷贝数。结果 :阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系 (r =0 970 ) ,可用于apelin基因表达的起始拷贝数定量测定。结论 :RQ PCR方法较常规PCR技术更为简便、准确、特异、灵敏 。

摘要：[目的 ]　用taqman技术建立沙门菌荧光定量聚合酶链反应 (PCR)检测方法 ,尝试快速、准确地鉴定沙门菌。　 [方法 ]　根据沙门菌GenBankAccessionNOU2 5 3 5 2基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的沙门菌基因片段克隆导入载体 ,构建的重组质粒经筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的制定。利用荧光定量聚合酶链反应 (PCR)技术进行各类菌株的定性鉴定。　 [结果 ]　应用重组质粒制作的定量曲线 ,其循环阈值与模板浓度的对数值具有良好的线性关系 ,相关系数为 0 .999。检测各类菌株 ,其中沙门菌 41株、H抗原丢失的沙门菌 16株均阳性 ;非沙门菌 10 9株均阴性。　 [结论 ]　建立了鉴定沙门菌的荧光定量PCR方法 ,该方法简便、快速、准确 。

摘要：运用L16（4^5）正交设计对芒果ISSR反应的5个因素，即DNA模板浓度、M矿浓度、dNTPs浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度在4个水平上进行优化试验，通过不同反应体系扩增效果比较，建立优化的芒果ISSR反应体系，