摘要：目的为适应流感疫情监测中快速诊断的需要,建立敏感特异的流感病毒多重逆转录PCR(MRTPCR)检测方法。方法对甲1型(H1N1)、甲3型(H3N2)、乙型流感病毒的血凝素(HA)基因保守区域分别设计引物进行MRTPCR。另设计了两对引物对H1N1和H3N2亚型流感病毒的神经氨酸酶(NA)N1、N2作亚型判断。结果MRTPCR可特异性检测出各型流感病毒的目的片段,相互间无交叉反应。二次PCR反应后对H1N1、H3N2流感病毒的检测灵敏度可达0.10TCID50/50μl以下,对乙型流感病毒的检测灵敏度可达0.01TCID50/50μl以下。应用此方法也可特异性地检测出H1N1和H3N2流感病毒的NA基因。结论用MRTPCR从临床患者含漱液标本中检出相关流感病毒的灵敏度要高于用狗肾传代细胞(MDCK)或鸡胚分离的灵敏度,达到了快速、敏感、正确检测流感病毒及其亚型的目的。

摘要：目的探讨鱼腥草对甲1型流感病毒核蛋白基因的作用。方法在甲1型流感病毒核蛋白基因保守区设计引物,对其进行筛选,同时对荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)条件和反应体系进行优化。设病毒对照组、药物对照组、细胞对照组和实验组,采用荧光定量RT-PCR法测定鱼腥草对甲1型流感病毒基因的效应。结果病毒对照组细胞出现细胞病变(CPE),血凝滴度为阳性,其他组无CPE,血凝滴度均为阴性。以荧光定量RT-PCR法重复5次取平均值,实验组RNA测定结果为(2.6±0.8)×106拷贝数/μgRNA,对照组为(2.9±1.2)×109拷贝数/μg RNA,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论鱼腥草可抑制甲1型流感病毒核蛋白基因的表达。

摘要：目的应用多重real-time PCR方法检测A型和B型流感病毒,探讨其在快速诊断流感病毒感染中的优越性。方法根据A型和B型流感病毒M基因的相对保守序列,设计两套特异性引物和TaqManMGB探针,进行多重real-time PCR检测A型和B型流感病毒。将该方法与病毒分离、免疫层析、传统RT-PCR进行比较,并对多重real-time PCR的特异性进行评估。并应用multiplexreal-time PCR方法和常规的病毒分离方法对广东省流感样病例334份咽拭标本进行检测,比较其灵敏性和特异性。结果多重real-time PCR反应可以检测到A、B型流感病毒的最低病毒量分别为10-1和10-3TCID50/反应。该方法在对流感病毒株以及其他呼吸道病毒株样品的检测中,未发现假阳性和假阴性现象,特异性为100%。该方法对334份临床标本进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定结合血清学检测)的符合率达100%,且灵敏度明显高于病毒分离。结论该研究建立的多重TaqManMGB real-time PCR是一种快速、灵敏性和特异性高的流感病毒检测方法,对于流感的早期诊断及指导临床有重要意义。