摘要：目的原核表达并纯化人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)毒力相关蛋白d(Virulence-associated protein,Vapd)。方法从GenBank查找Mh Vapd基因序列,设计引物并进行优化,合成Vapd片段并以此为模板,PCR扩增Vapd,然后用EcoRI和XhoI进行双酶切并连接表达载体pET28a,构建原核重组质粒pET28a-Vapd,转化大肠埃希菌BL21(dE3),IPTG诱导目的蛋白表达,重组产物经镍柱亲和层析纯化。结果合成的Vapd基因全长为303bp,连接原核表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-Vapd。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(dE3),IPTG诱导表达分子质量标准为15ku的重组Mh Vapd蛋白,与理论分子质量大小相符合。Vapd蛋白具有可溶性,纯化后的目的蛋白电泳检测为单一条带。结论成功构建原核重组载体pET28a-Vapd并纯化获得Vapd蛋白,为进一步研究Vapd蛋白的致病机制奠定了基础。