摘要：目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。

摘要：湖北省自20世纪60年代开始开展了粪便毛蚴孵化法诊断家畜血吸虫病的研究。最初试验的方法为瓦钵试管倒插孵化法，几经改进之后用特制的塑料杯取代瓦钵，于20世纪70年代末将塑料粪杯设计定型并批量生产，使试管倒插孵化法在全省范围内得到推广应用。目前，该方法仍用于家畜血吸虫病的确诊。

摘要：目的研发羊粪收集袋,在简便易行、避免污染的前提下提高羊粪样本收集的准确性和完整性;改良塑料杯顶管孵化法,使其操作简便规范,具有较强的可比性,以适应羊日本血吸虫病病原学诊断和科学研究的需要。方法基于湖区山羊体形特征,采用棉纱粗平布面料设计缝制一种可固定在羊臀部、可脱卸、可避免尿液污染(粪尿分离)的羊粪收集袋。在进行羊粪塑料杯顶管孵化前,采用机械法代替常规人工捣碎羊粪标本,比较机械捣碎处理对顶管孵化法孵化毛蚴的影响。在塑料杯顶管孵化法顶管与杯盖橡皮圈之间加一滤膜,以阻挡粪渣漂浮物进入顶管,比较薄层脱脂棉滤膜、厚层脱脂棉滤膜、100孔/25.4 mm^2尼龙绢和150孔/25.4 mm^2尼龙绢等4种滤膜对毛蚴孵出观察的影响。结果羊粪收集袋由前腿固定衫、后腿固定衫和粪便袋3部分构成,固定衫主要功能是固定收集袋,使其在羊活动时不移位且能承载重量,粪便袋主要功能是存放粪便。携带粪便收集袋的山羊活动不受影响,所排放粪便均落入袋中,并可按需要随时取用。该袋装卸方便,粪便标本可避免尿液污染,收集袋可在清洗后重复使用。羊粪样本用于塑料杯顶管毛蚴孵化法前,加适量水后采用JYL-C16V型九阳牌料理机,按18 000 r/min搅碎10 s,连续3次,每次间隔5 s,可将山羊粪便标本均匀粉碎,采用该法机械搅碎羊粪对毛蚴孵化无影响。同一份羊粪标本用于塑料杯顶管孵化法时,在顶管与橡皮圈间分别加垫100孔/25.4 mm^2尼龙绢、150孔/25.4 mm^2尼龙绢、薄层脱脂棉滤膜和厚层脱脂棉滤膜后,获得毛蚴总数分别为541、620、344条和211条,表明采用100孔/25.4 mm^2尼龙绢和150孔/25.4 mm^2尼龙绢观察效果均好。结论羊粪收集袋操作方便、适用、可重复使用,可用于山羊血吸虫感染病原学诊断和科学研究;用机械搅碎和150孔/25.4 mm^2尼龙绢改良塑料杯顶管法的相关操作,可提高山羊日本血吸虫病原学检测的方便性和准确性。