摘要：目的探讨家族序列相似性13A(FAM13A)基因与慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)小气道重塑的关系,及干扰FAM13A基因表达对人气道上皮细胞(16HBE细胞)凋亡和增殖表型的影响。方法收集2018年1月至2020年1月宁夏医科大学总医院胸外科因肺部肿瘤或肺大泡行手术治疗的患者74例,根据肺功能和吸烟史分为4组:肺功能正常不吸烟组(正常组,23例)、肺功能正常吸烟组(吸烟组,24例)、慢阻肺不吸烟组(11例)和慢阻肺吸烟组(16例),采用免疫组化检测各组小气道FAM13A基因表达,并分析其与肺功能气流受限指标的相关性。设计FAM13A基因短片断干扰RNA(shRNA)片段,构建和包装FAM13A基因shRNA慢病毒载体,转染16HBE细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹法检测FAM13A基因表达水平,并筛选最佳shRNA序列。运用流式细胞技术检测细胞凋亡率和细胞增殖标志物Ki-67荧光强度。结果FAM13A主要表达于小气道上皮细胞的胞质,慢阻肺不吸烟组和慢阻肺吸烟组小气道上皮细胞FAM13A吸光度(A)值均高于正常组和吸烟组(0.365±0.026、0.412±0.053比0.113±0.018、0.105±0.009,均P<0.05),且其与肺功能气流受限指标第一秒用力呼气容积(FEV1)与用力肺活量(FVC)的比值(FEV1/FVC)及FEV1占预计值百分比(FEV1%pre)呈负相关(r=-0.48和r=-0.40,均P<0.05)。成功构建FAM13A基因shRNA慢病毒载体,并在16HBE细胞系上实现FAM13A干扰。转染16HBE细胞后,shRNA的靶标序列2(shRNA-target-2)的FAM13A表达量降低(均P<0.01);相比于阴性对照组(shRNA-NC),FAM13A shRNA组细胞凋亡率降低(P=0.023),且Ki-67荧光强度也降低(P=0.042)。结论FAM13A基因在慢阻肺小气道上皮细胞中表达增高,且与慢阻肺气流受限相关,FAM13A基因可能通过影响人气道上皮细胞凋亡和增殖而参与慢阻肺小气道重塑的过程。

摘要：目的探讨解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)对人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖和凋亡的作用,以及白介素-4(IL-4)对ADAM33表达的影响。方法分别以1、10、50和100 ng/mL浓度的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组作为对照,分别采用Real-Time PCR和Western blotting法检测ADAM33 mRNA和蛋白的表达。设计并合成ADAM33-siRNA,瞬时转染HASMCs,Real-Time PCR法和Western blotting法筛选出抑制率最高的siRNA,以抑制率最高的siRNA瞬时转染HASMCs;MTS和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况。结果当不同浓度的IL-4刺激HASMCs时,ADAM33 mRNA和蛋白的表达均呈浓度依赖性。与对照组比较,IL-4浓度为50 ng/mL组和100 ng/mL组mRNA和蛋白的相对表达量分别增加了5.94、7.6倍和3.72、4.57倍,差异均有统计学意义(P0.05)。在3条干扰RNA中,ADAM33-siRNA-575的抑制效率最高,在mRNA水平的抑制率为81.08%。在24、48和72 h,干扰组的细胞增殖明显低于阴性对照组(P<0.05),增殖抑制率分别为15.38%、32.83%和22.78%;干扰组的细胞凋亡率为(25.88±3.37)%,明显高于阴性对照组的(8.95±0.51)%(P<0.05)。结论 ADAM33可促进HASMCs增殖,而细胞因子IL-4可促进其表达,两者可能在气道重塑中起着重要的作用。

摘要：目的探讨解整合素-基质金属蛋白酶33(ADAM33)在白介素-4(IL-4)刺激的人气道平滑肌细胞(HASMCs)中对NF-κB和TGF-β1表达的影响,为进一步完善哮喘的发病机制提供理论基础。方法以50μg/L的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组为对照,24 h后实时荧光定量PCR法和Western blot法检测ADAM33的表达;设计并合成ADAM33-siRNA,IL-4刺激24 h后瞬时转染ADAM33-siRNA,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测抑制率;并且检测TGF-β1、NF-κB mRNA和蛋白的表达情况。结果 50μg/L的IL-4较对照组明显促进了HASMCs中ADAM33的表达(P<0.05),在mRNA水平表达量增加约4.36倍,蛋白水平增加约3.3倍;ADAM33-siRNA-575明显抑制了ADAM33在HASMCs中的表达;干扰组、阴性对照组和空白对照组TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为0.602±0.024、1.01±0.176和1.239±0.171,NF-κB mRNA的表达量分别为0.54±0.08、1.014±0.21和1.049±0.378;TGF-β1蛋白的表达量分别为0.227±0.016、0.7±0.048和0.715±0.025,NF-κB蛋白的表达量分别为0.335±0.048、0.922±0.04和0.943±0.046。干扰组TGF-β1、NF-κB不论是在mRNA水平,还是在蛋白水平,均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 ADAM33可能是IL-4调节人气道平滑肌细胞NF-κB/TGF-β1信号通路中的一个关键信号分子,有望成为防治哮喘的重要靶点。

摘要：中药复方针对气道炎症反应、气道高反应性及气道重塑具有较为明显的作用,治疗咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma,CVA)独具优势,可有效缓解CVA的临床症状,改善患者肺功能。但是,目前对于中药复方基于发病机制治疗CVA的研究仍缺乏大样本、多中心及多盲的研究模式;中药复方中单味药用量不同且成分复杂,配伍缺乏精准度及标准化;相关动物实验中造模大鼠病证结合模型单一,与人体差异较大,无法发挥中医辨证论治的优势。今后需进一步探索中药复方的治疗机制,加强治疗的标准化研究,设计更为丰富的证型一体的动物模型,同时,明确中药方剂潜在的不良反应。

摘要：目的探讨解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)对人肺成纤维细胞MRC-5增殖、周期、凋亡的影响,以及白介素-4(IL-4)对其表达的影响。方法分别以1 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml浓度的IL-4刺激MRC-5,以未刺激组细胞为对照,实时荧光定量PCR法检测ADAM33 mRNA的表达情况,Western blotting法检测蛋白表达情况;设计并合成ADAM33-siRNA,瞬时转染MRC-5,MTS法检测增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果当不同浓度的IL-4刺激MRC-5时,ADAM33 mRNA和蛋白的表达均呈浓度依赖性,1 ng/ml组与0 ng/ml组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);10 ng/ml、50ng/ml、100 ng/ml与0 ng/ml组相比较,差异有统计学意义(P<0.05);ADAM33-siRNA明显抑制了ADAM33在MRC-5中的表达;MTS结果显示,在24、48、72 h,干扰组的增殖明显低于阴性对照组,抑制率分别为27.3%、36.6%、19.2%;干扰组S期占的比例(31.69±4.14)%明显低于阴性对照组(47.19±0.99)%(P<0.05);干扰组的细胞凋亡率(28.49±8.79)%明显高于阴性对照组(8.43±5.11)%(P<0.05)。结论 ADAM33可促进人肺成纤维细胞增殖,而细胞因子IL-4可促进其表达,它们可能在气道重塑中起着重要的作用。