摘要：目的构建人水甘油通道蛋白9（AQP9）短发夹RNA（shRNA），筛选出沉默效果明显的重组质粒，检测AQP9的shRNA对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）细胞模型的作用。方法设计合成针对人AQP9的小干扰RNA，退火形成双链shRNA后插入pGensil-1质粒中，并将其转染L02肝细胞，逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）及Westem blot筛选出沉默效果明显的重组质粒。经油酸诱导L02细胞脂肪变性建立NAFLD细胞模型，通过油红O染色，测定甘油三酯、游离脂肪酸及甘油含量，检测重组质粒对NAFLD细胞模型的作用。数据比较采用方差分析。结果经RT-PCR及Westem blot筛选，pshRNA—AQP9a转染组mRNA及蛋白质相对表达率为25．10％士1．19％及25．41％±1．96％，与未处理L02细胞组的39．33％±1．69％及35．08％±1．89％相比，均明显降低∽值均〈0．01）；将重组质粒pshRNA-AQP9a转染NAFLD细胞模型能够降低其AQP9的mRNA及蛋白质表达量；油红O染色结果显示，油酸／pshRNA-AQP9a转染组细胞内脂质含量明显减少。油酸／pshRNA-AQP9a转染组细胞内甘油三酯、游离脂肪酸及甘油含量分别为（2．738±0．231）mmol／L、（1．182±0．168）mmol／L和（0．730±0．084）mmol／L，油酸组分别为（3．218土0．220）mmol／L、（1．538±0．193）mmol／L及（1．024±0．148）mmol／L，油酸／pshRNA-AQP9a转染组均明显降低（尸值均〈0．05）。结论降低AQP9表达量能够减轻NAFLD细胞模型的脂肪变l生程度，为进一步研究AQP9对NAFLD的基因治疗奠定基础。

摘要：目的将人水甘油通道蛋白9(AQP9)真核表达质粒pEGFP-N1-AQP9及干扰质粒pshRNA-AQP9通过电穿孔转化减毒沙门菌株SL7207,并验证其表达情况,为阐明AQP9在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的作用奠定基础。方法从人肝脏组织中通过RT-PCR获得AQP9基因,克隆到载体pEGFP-N1上,构建真核表达质粒pEGFP-N1-AQP9,设计合成针对人AQP9的siRNA,退火形成双链shRNA,并插入pGenesil-1质粒中,构建干扰质粒pshRNA-AQP9,电穿孔转化减毒沙门菌株SL7207,通过PCR、Western blot验证其表达情况,并检测其稳定性。结果成功构建pEGFP-N1-AQP9及pshRNA-AQP9重组质粒,将其转化SL7207后,能在重组沙门菌中表达。结论成功构建SL7207/pEGFP-N1-AQP9及SL7207/pshRNA-AQP9重组沙门菌,为进一步研究AQP9对NAFLD的基因治疗奠定基础。