摘要：目的研究戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)致大鼠癫痫持续状态模型(status epilepticus,SE)中,水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)在72 h内的动态表达以及SE后脑水肿的变化,为下一步抑制AQP4的表达选择最佳时间点。方法腹腔注射PTZ建立大鼠SE模型,将实验大鼠随机分为6组:对照组(腹腔注射生理盐水)、SE后0、12、24、48、72 h组(腹腔注射PTZ致痫)。采用干-湿重法检测海马组织中的水含量;免疫组化检测AQP4在海马内的表达及分布;Western blot、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组大鼠海马组织中AQP4蛋白和mRNA的表达。结果干-湿重法结果提示SE后12 h大鼠脑水含量开始增加,至24 h大鼠脑水含量达到最高,然后降低,至72 h时大鼠脑组织水含量仍高于对照组(均P<0.05);免疫组化结果显示AQP4主要表达于海马CA3区;Western blot、qRT-PCR结果显示致痫组大鼠海马组织内AQP4蛋白和mRNA的表达均从SE后12 h开始增加,24 h到达高峰(均P<0.05),然后下降,至72 h时仍有表达且高于对照组(P<0.05)。结论 SE后24 h AQP4的表达达到最高峰,且脑水肿最为明显,此时可能是抑制AQP4表达从而控制癫痫的最佳时间。

摘要：目的:利用原核表达系统融合表达人水通道蛋白4(AQP4)胞外区,并进行纯化及鉴定。方法:根据大肠埃希菌密码子偏嗜性及后续实验需要设计并人工合成AQP4胞外区序列,退火形成双链后克隆至pET32a(+)载体,构建原核重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果:重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白pET32a(+)-AQP4胞外区相对分子质量约为26 000,可与鼠抗组氨酸单克隆抗体特异性结合,可以可溶性形式存在于上清液中,纯化的融合蛋白纯度达70%以上。结论:成功构建了重组表达质粒pET32a(+)-AQP4胞外区,并成功表达融合蛋白。

摘要：目的　克隆大鼠水通道蛋白 4 (AQP4 )基因并构建其载体为进一步研究提供理论基础和研究工具。方法　提取正常健康SD大鼠小脑皮质总RNA ,采用随机引物法进行逆转录构建大鼠小脑cDNA文库 ,应用自行设计的AQP4特异性引物 ,进行AQP4特异性扩增。利用设计的酶切位点进行相应的内切酶酶切后插入 pcDNA3.1Zeo( + )质粒中。结果　引物扩增出长度为 993bp的片段 ,为AQP4序列的全段 ,并正确插入到 pcDNA3.1Zeo( + )质粒中。上海生工生物工程技术公司片段测序结果与U14 0 0 7报道的序列相同。结论　正确克隆了大鼠AQP4基因并成功构建了其载体 。

摘要：目的通过对清肺排毒汤功效和新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病机的分析,基于计算机辅助药物设计(CADD)从多靶点结构出发系统探索清肺排毒汤排毒、抑制炎症风暴、利水渗湿3个方面的物质基础和分子机制。方法 TCMSP下载清肺排毒汤成分,基于血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)、白细胞介素-6受体(IL-6R)和水通道蛋白(AQP)分别进行分子对接虚拟筛选并对其结合模式进行分析。对利水药白术、茯苓、猪苓、泽泻进行反向靶点预测和GO分析和KEGG通路富集分析,预测其作用机制。结果阻断病毒作用最突出的前3位中药为甘草、麻黄、枳实,抑制炎症作用最突出的前3位中药是甘草、柴胡、紫菀;清肺排毒汤4个子方中,小柴胡汤阻断病毒、抑制炎症风暴的潜在活性化合物数均排第1。槲皮素及其衍生物对ACE2和IL-6R2个靶点均具有较强结合能力,是潜在的双靶点活性化合物。ACE2的Lys353残基是化合物与ACE2结合的关键位点。白术、茯苓、猪苓、泽泻缺乏阻断病毒、抑制炎症风暴的化合物,分子对接结果显示,这4味药材中含有的东莨菪内酯、去氢齿孔酸、α-D-半乳糖、环氧泽泻烯具有与水通道蛋白4(AQP4)的潜在结合能力。结论清肺排毒汤可通过多种化合物分别与ACE2、IL-6R、AQP4结合,发挥排毒、抑制炎症风暴、利水渗湿的作用;各组成子医方配伍合理,通过多点协同、优势互补发挥防治作用;得到了中药阻断新型冠状病毒(SARS-Co V-2)成分关键的结合位点Lys353,为清肺排毒汤药效机制的多角度挖掘和单体成分的现代化开发提供线索。

摘要：目的探讨胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的最佳治疗剂量和时间窗。方法应用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型,将48只大鼠模型,按二因素四水平[L16(45)]正交试验设计分组。治疗时间窗设定缺血1.0、1.5、2.0、2.5 h,共4个水平,治疗剂量设定5、10、20、40 mg/kg共4个水平。按照设定剂量经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和脑组织水通道蛋白4(AQP-4)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和环氧合酶2(COX-2)的水平,评价胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的疗效。结果①根据血清和脑组织AQP-4水平分析结果,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的最佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血2.0 h,腹腔注射20 mg/kg;脑缺血1.5 h,腹腔注射20 mg/kg。②根据血清和脑组织MMP-9水平分析结果,最佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血1.5 h,腹腔注射20 mg/kg;脑缺血2.0 h,腹腔注射20 mg/kg。③根据血清和脑组织COX-2水平分析结果,最佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血1.5 h,腹腔注射10 mg/kg;脑缺血1.5 h,腹腔注射20 mg/kg。结论根据用药剂量最小化和治疗时间窗最大化的原则综合评价,根据AQP-4、MMP-9、COX-2测定结果,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的最佳治疗时间窗和剂量为脑缺血1.5～2.0 h,腹腔注射剂量10～20 mg/kg。

摘要：脑水肿是指脑实质内液体异常聚集的一种病理状态。引起脑水肿的原因包括脑卒中、脑出血、创伤、感染及肿瘤等,其中缺血性脑卒中是引起脑水肿的常见原因。缺血性脑卒中引起的脑水肿根据演变过程可分为早期的细胞毒性脑水肿、随后的离子性脑水肿以及最后且最严重的血管源性脑水肿。细胞毒性脑水肿和血管性脑水肿的研究已相对较透彻。细胞毒性脑水肿的形成与钠泵介导的原发性主动转运停止、Na-K-Cl离子通道及SUR1-调控NCCa-ATP通道等离子通道被激活有关;血管性脑水肿的形成与血脑屏障被破坏导致血管通透性增加有关。而目前国内外关于离子性脑水肿的文献相对很少。近些年脑内胶质淋巴系统的发现使离子性脑水肿的发生机制取得一些突破性进展。离子性脑水肿的产生很可能与脑室系统中的脑脊液进入脑实质有关,减少急性缺血性脑卒中患者脑室系统中的脑脊液进入脑实质或许能成为治疗脑水肿的一种新手段。本文在介绍细胞毒性脑水肿及血管性脑水肿的发病机制、影像学表现及治疗等方面的进展外,着重介绍离子性脑水肿的发生机制、影像学表现及治疗等最新进展。