摘要：OA是一种发病机制复杂的多因素疾病,其病理改变以关节软骨损害为主,最终发生关节软骨退变、纤维化、断裂、溃疡及整个关节面的损害。然而骨关节炎的发病机制尚不清楚,难以避免其发展至末期行关节置换,因此亟需在其早期控制甚至逆转病情的治疗方案而非仅传统的姑息疗法。沉默信息调节因子1(SIRT1)是抗衰老基因Sirtuins家族中目前研究最为广泛的成员,具有抑制细胞凋亡、延缓衰老、抵抗应激反应、参与新陈代谢等重要作用,成为近年来热门的药物设计靶标之一。本文综述SIRT1在骨关节炎中维持软骨稳态的研究进展,以期提升对SIRT1在骨关节炎发病机制中的作用的认识,更好地指导日后开辟治疗骨关节炎的新途径。

摘要：背景:沉默信息调节因子1(sirtuin type 1,Sirt1)基因与骨关节炎有密切联系,但其具体作用机制尚不明确。目的:探讨Sirt1基因对软骨细胞胞外基质的影响及其具体的表现形式。方法:体外分离并培养小鼠的膝关节软骨细胞,通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色等方法鉴定软骨细胞。根据实验设计加入不同的作用物质而将实验分为3组:空白对照组,EX-527组(Sirt1基因的抑制剂,终浓度为1 mmol/L)和白藜芦醇组(Sirt1基因的激动剂,终浓度为100μmol/L)。RT-PCR检测Sirt1基因,软骨细胞外基质特异性合成基因Sox9、II型胶原蛋白和聚蛋白多糖及软骨细胞外基质特异性降解基因MMP-3、MMP-13和ADAMTS-5的m RNA表达水平。结果:免疫荧光染色检测显示,Ⅱ型胶原染色阳性细胞数占90%以上,表明培养细胞为软骨细胞。与空白对照组比较,白藜芦醇组中Sirt1基因m RNA表达明显上调,Sox9、聚蛋白多糖和Ⅱ型胶原的m RNA表达显著增加,MMP-3、MMP-13和ADAMTS-5的m RNA表达显著减少(P<0.05);EX-527组中Sirt1基因m RNA表达明显下降,Sox9、聚蛋白多糖和Ⅱ型胶原的m RNA表达显著减少,MMP-3、MMP-13和ADAMTS-5的m RNA表达显著增加(P<0.05)。结论:Sirt1基因能够对软骨细胞胞外基质产生影响,且Sirt1的表达可以促进软骨细胞胞外基质的合成并且减缓软骨细胞胞外基质的降解。

摘要：目的:观察杏仁核沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白对慢性束缚应激(CRS)大鼠抑郁样行为的影响。方法:60只SD雄性大鼠随机分为6组(n=10):正常对照组(Control)、慢性束缚应激组(CRS)、CRS+氟西汀(FLU)组(CRS+FLU)、CRS+生理盐水组(CRS+NaCl)、CRS+SIRT1过表达组(CRS+AAV-SIRT1)和CRS+空载体组(CRS+AAV-EGFP)。除了正常对照组,其余各组均接受慢性束缚应激造模21 d。造模结束后,氟西汀组和生理盐水组大鼠每天分别灌胃给予氟西汀(10 mg/kg)或生理盐水(10 mg/kg),持续3周;SIRT1过表达组和空载体组大鼠分别脑立体定位,注射腺相关病毒AAV-SIRT1或AAV-EGFP于杏仁核,待病毒表达3周;正常组和抑郁症组大鼠则不给予任何药物。应用糖水偏好实验(SPT)、旷场实验(OFT)和强迫游泳实验(FST)检测各组大鼠的抑郁样行为学变化;蛋白免疫印迹实验检测大鼠杏仁核中SIRT1蛋白的表达;免疫荧光技术检测大鼠杏仁核中SIRT1阳性细胞数量。结果:与正常对照组相比,CRS抑郁大鼠杏仁核中SIRT1蛋白水平和SIRT1阳性细胞数显著降低(P<0.01),糖水偏好程度明显降低(P<0.01),旷场实验中运动总距离和中心停留时间显著缩短(P<0.01),强迫游泳不动时间明显延长(P<0.01)。氟西汀治疗或SIRT1过表达均可以部分逆转CRS大鼠杏仁核SIRT1蛋白和SIRT1阳性细胞数的下调(P<0.05,P<0.01),并且可以显著改善上述抑郁样行为。结论:氟西汀治疗可以部分逆转CRS大鼠下调的SIRT1蛋白及SIRT1阳性细胞数,同时显著改善抑郁样行为,其抗抑郁疗效可能与CRS大鼠杏仁核中SIRT1蛋白的上调有关。

摘要：目的沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白去乙酰化酶,可作为致癌基因通过抗凋亡活性在肿瘤发生中起作用,并涉及自噬,衰老,凋亡,增殖等多种细胞过程。因此,本研究通过基因敲除去乙酰化酶SIRT1,探究其对靶向结合miR-138b-5p对前列腺癌细胞PC-3氧化应激和凋亡的作用。方法设计合成SIRT1shRNA,将inhibitor和shRNA-SIRT1单独或联合转染PC-3细胞,RT-PCR检测miR-138b-5p和SIRT1的表达水平;克隆形成实验检测细胞的生长能力;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及细胞内丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测线粒体膜电位的变化;免疫印迹法检测Caspase-3,Caspase-9,Bax/Bcl-2的蛋白表达。结果miR-138-5p mimic转染PC-3细胞后,miR-138-5p的表达显著升高(P<0.05),SIRT1的表达显著降低(P<0.05)。inhibitor能明显减弱miR-138-5p对SIRT1的表达的抑制作用(P<0.05)。shRNA-SIRT1能显著降低SIRT1的表达水平(P<0.05)。敲除SIRT1明显抑制PC-3细胞克隆形成(P<0.05)。同时,敲除SIRT1线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率增加,促进细胞凋亡(P<0.05)。敲除SIRT1还能明显增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活力(P<0.05)。此外,敲除SIRT1显著增加Caspase-3,Caspase-9及Bcl/Bax的蛋白表达水(P<0.05)。结论基因敲除SIRT1靶向结合miR-138-5p抑制前列腺癌PC-3细胞的生长,诱导PC-3细胞氧化应激和凋亡,以及促进凋亡相关蛋白的表达。

摘要：目的利用Topomer CoMFA法对两类咪唑并噻唑衍生物类激动剂进行研究,并通过研究设计和改造出新的沉默信息调节因子1 ( silent information regulator 1 , SIRT1 )激动剂方法利用药物设计平台Sybyl - X2. 1构建的咪唑并噻唑类SIRT1激动剂的分子结构,釆用Topomer CoMFA方法自动构建该类化合物的三维定量构效关系模型,考察它们的活性预测值与实验值相关性,依据Topomer CoMFA的等值线图设计全新SIRTI激动剂。结果获得了合理有效的Topomer CoMFA模型,依据该模型的等值图得到了高活性SIRT1激动剂的设计思路,在苯并吡嗪的4号位上替换显负电性且大体积的取代基,或在1、3号位上替换显正电性且大体积的取代基均可以提高化合物的SIRT1激动活性。结论基于29号分子,将其苯并吡嗪环上的4号位取代基变为溴代,2号位取代基替换成小体积的甲基,同时1、3号位取代基替换成大体积的异丙基得到的全新化合物显示出最高的S1RT1激动活性。