摘要：对河豚毒素(TTX)及其五个衍生物进行了量子化学计算,根据对其电子结构及相关分析研究结果,结合其空间结构特点,讨论了它们的活性部位、作用方式及构效关系,发现胍基是最重要的的正电中心,在与受体作用时发挥接受电子的重要作用;O(17),O(18),O(15),O(21),O(19)等氧原子是供电子的主要负电部位.对TTX与石房蛤毒素(STX)进行了电子结构和空间结构比较,发现它们具有相似的电子结构特征,而且主要活性部位在空间位置上基本相互对应.这表明钠离子通道阻断剂在与受体相互作用时具有共同的结构特征和作用方式,同时也为探讨受体结构提供了有价值的信息.

摘要：从我国渤海红鳍东方豚(Fugu rubripes)的卵巢中分离到了一株海洋细菌B3B,对其发酵产物进行了分离和精制,通过小鼠试验、高效液相色谱试验及质谱分析,认定其发酵产物中含有河豚毒素(tetrodotoxin,TTX).采用均匀设计回归分析及优化系统对其培养基组分做了优化,获得了较理想的发酵培养基,使TTX的产量提高了128.7%.

摘要：目的用计算机辅助分子设计技术,设计河豚毒素(TTX)小分子拮抗肽,分别用免疫学方法和动物实验进行验证。方法利用计算机辅助分子设计技术,对TTX的空间结构进行了优化;用分子对接确定了TTX关键位点;用分子模建设计了3个能与TTX结合的小分子拮抗肽;分别用竞争ELISA进行免疫学筛选;用动物实验进行中和活性测定。结果成功设计了3个针对TTX的小分子拮抗肽并进行了多肽合成,用竞争ELISA筛选到针对TTX的小分子拮抗肽P2,拮抗肽P2浓度与TTX的结合能力成正比。动物实验中,针对TTX的小分子拮抗肽P2对注射2.5倍半数致死剂量TTX昆明小鼠的保护率为25%,起到了一定解毒效果。结论获得了能与TTX特异性结合的中和性小分子拮抗肽,TTX浓度达到4.05μg/mL(LD50的2.5倍),TTX拮抗肽P2对实验组小鼠的保护率为25%。

摘要：采用快速有效的数学统计方法对堀越氏芽孢杆菌(Bacillus horikoshii)S184产河豚毒素的发酵条件进行了优化。利用Plackett-Burman设计,从众多影响产河豚毒素的因素中筛选出影响较大的3个因素:蛋白胨、磷酸盐质量浓度和接种体积分数。在此基础上,再利用响应面法中的杂合设计进行优化,通过拟合得到响应曲面函数,并获得了最佳的实验条件。在该实验条件下,河豚毒素产量从666.65 ng/L提高到1 900.60 ng/L。

摘要：河豚毒素传感器响应性能与固定化菌体的量和辅料的量都有一定关系。设计微生物量为10μL,不加辅料及加入1%、2%辅料3种微生物膜,以夹层法固定微生物膜,以氧电极为换能器,分别组装微生物传感器,通过测定传感器的线性范围、线性相关系数以及加标回收率等获知固定化膜的通透性的好坏和响应信号的大小,最后确定3种组合中较优膜为10μL菌悬液加入1%的辅料。以最优膜组装毒性传感器与高效液相色谱方法的对照发现两者的差异不显著,表明试验建立的毒性微生物传感器方法可以很好地测定河豚毒素的毒性。

摘要：试验旨在通过大肠杆菌表达系统表达鼠源重组CD40L蛋白,探讨其对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)人工完全抗原在免疫BALB/c小鼠过程中的免疫增强作用。用Trizol试剂提取BALB/c小鼠脾脏总RNA并反转录成cDNA,根据CD40L CDS区设计引物,PCR扩增目的基因,构建pGEX4T-1重组载体,进行原核表达,并纯化重组CD40L蛋白;根据曼尼希反应原理,用甲醛法制备TTX免疫原TTX-BSA和检测原TTX-OVA;以人工重组蛋白CD40L佐剂组为试验组,弗氏佐剂组作为对照组,免疫BALB/c小鼠,用ELISA方法结合SPSS 19.0软件分析各组免疫效果,探讨重组CD40L蛋白在TTX-BSA免疫过程中对免疫效果的影响。结果显示,本试验成功扩增了783 bp的CD40L目的基因,原核表达并纯化了融合GST标签的55 ku鼠源CD40L重组蛋白;与人工制备的TTX-BSA协同免疫小鼠试验结果显示,在免疫初期与弗氏佐剂相比,CD40L具有极显著的免疫增强效果(P<0.01)。综上所述,重组蛋白CD40L与TTX-BSA完全抗原协同免疫小鼠,在免疫初期CD40L具有增强机体对半抗原的应答强度的作用,为进一步开发适于小分子半抗原抗体高效制备的免疫增强佐剂奠定基础。

摘要：河豚毒素是一种神经毒,其生物测定方法有最小致死量法、小鼠单位法、死亡时间倒数曲线法。本文旨在对这三种方法进行初步评价;实验结果:三法之间无显著性差异p>0.05;但小鼠单位法具有设计周密合理,时间查对精确,能体现小鼠死亡时间与毒量间的关系,可选时间范围广,动物重量可选范围大,比较节省动物和时间的优点,值得推广应用。

摘要：以月腹刺鲀(Gastrophysus lunaris)卵巢为原料,利用超声波辅助提取河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)。通过单因素实验及二次回归旋转组合设计实验研究液料比、超声温度、超声时间等因素对提取率的影响,确定超声波辅助提取河豚毒素的最佳工艺条件。结果表明:在实验范围内影响河豚毒素得率的各因素大小依次为液料体积质量比、超声温度、超声时间;超声波辅助提取河豚毒素的最佳工艺条件为液料体积(mL)质量(g)比3.03∶1,超声温度39℃,超声时间22 min,该工艺条件下提取河豚毒素得率为63.57μg/g。

摘要：目的:研究从河豚鱼内脏中提取河豚毒素(TTX)的最佳提取条件。用超声提取法与传统的水浴法和回流法进行比较。方法:采用超声提取法对河豚毒素的提取方法进行研究,设计L9(34)正交表,采用紫外分光光度法检测,以提出的TTX含量为评价指标,优选TTX的提取条件。结果:超声时间、乙酸用量、提取次数对TTX的提取量均有影响,其中提取时间有显著影响,最佳提取工艺为用河豚内脏的3倍量的0.1%的乙酸,超声提取3次,每次40min。超声提取法优于水浴法和回流法。

摘要：目的:构建抗河豚毒素(TTX)单链抗体表达载体并进行活性分析。方法:提取抗TTX单克隆抗体3D4杂交瘤细胞总RNA,根据鼠源单克隆抗体设计轻、重链可变区基因VL和VH引物并进行RT-PCR扩增,借助Linker(G1y4Ser)3连接成单链抗体TTX-ScFv(VH-Linker-VL)基因,克隆至表达载体pET-22b(+)后转入***21(DE3)诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA检测表达蛋白的反应活性。结果:测序结果表明TTX-ScFv基因全长744 bp,经NCBI blast分析氨基酸序列符合鼠抗体可变区特征,其中VH366 bp,VL333 bp,Linker 45 bp,SDS-PAGE与薄层扫描分析显示表达产物相对分子量为26.045ku,表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总量的42%;ELISA检测表明TTX-ScFv可与TTX特异结合。结论:成功构建了抗TTX单链抗体表达载体,表达产物具有一定的免疫学结合活性。