摘要：目的 研究非对称小干扰RNA（asymmetric structure of interfering RNA,aiRNA）沉默泛素特异肽酶22（ubiquitin specficpeptidase 22,USP22）基因对膀胱癌EJ细胞增殖的影响及其相关机制.方法 2010年8月至2012年3月,我们设计并合成USP22 aiRNA及阴性对照aiRNA（NC-aiRNA） USP22 aiRNA序列结构包括长度分别为15 bp和21 bp的正义链和反义链,将此aiRNA命名为USP22 aiRNA（15/21）,利用脂质体转染膀胱癌EJ细胞.实验分3组：对照组、NC-aiRNA组和USP22 aiRNA（15/21）组转染后48 h,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法分别检测USP22、Myc、cyclin D1和cyclin E1基因mRNA和蛋白表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测EJ细胞的增殖活性,荧光素酶报告基因检测系统检测Myc启动子活性 利用染色质免疫共沉淀法（chromatin immunoprecipitation,ChIP）分析沉默USP22基因后转录因子Sp1与Myc基因启动子的结合情况结果 与对照组相比,转染USP22 aiRNA（15/21） 48 h后EJ细胞中的USP22、Myc、cyclin D1和cyclin E1的mRNA和蛋白表达水平分别下调了（87.4±5.2）％和（91.2±7.3）％、（69.2±4.3）％和（61.0±6.6）％、（78.5±4.1）和（67.4± 5.5）％、（81.0±5.5）％和（78.3±4.0）％（P＜0.05）.MTT结果显示,USP22aiRNA（15/21）组EJ细胞的增殖活性明显受到抑制,在24、48、72和96h4个时间点的细胞生长活性分别为（85.4±5.7）％、（71.3±8.4）％、（52.5±6.7）％和（45.8±6.4）％（P＜0.05）.荧光素酶报告基因检测结果显示,USP22 aiRNA（15/21）组Myc启动子的转录活性下调（65.5±4.2）％（P＜0.05）.ChIP结果进一步显示,沉默USP22抑制了转录因子Sp1与Myc启动子的结合,USP22 aiRNA（15/21）组Sp1与Myc启动子的结合能力相比对照组下调了（48.0±3.2）％（P＜0.05）.结论 USP22 aiRNA（15/21）可能通过抑制Myc基因启动子与转录因子Sp1的结合,下调Myc的表达,从而抑制膀胱癌EJ细胞的增殖.

摘要：目的:研究小RNA干扰泛素特异肽酶22(ubiquitin specific peptidase22,USP22)基因表达对膀胱癌EJ细胞增殖的影响。方法:设计并合成针对USP22基因的3条特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体Translipid转染EJ细胞。通过实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后EJ细胞中USP22mRNA和蛋白表达水平,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布。结果:3条针对USP22基因的特异性siRNA均能抑制USP22mRNA和蛋白的表达,其中USP22-siRNA-1的沉默效率最高。转染USP22-siRNA-148h后,EJ细胞中USP22mRNA和蛋白表达水平分别下调65%和80%,而且细胞增殖明显受到抑制,细胞周期被阻滞于G1期。结论:USP22特异性siRNA能够有效沉默USP22基因表达,并显著抑制膀胱癌EJ细胞增殖。推测USP22基因可能成为治疗膀胱癌的一个新靶点。

摘要：目的 观察非对称小干扰RNA（aiRNA）对膀胱癌EJ细胞泛素特异肽酶22（USP22）基因的沉默效率及特异性的影响.方法 设计并合成USP22基因的小干扰RNA（siRNA）及aiRNA,利用脂质体Translipid转染EJ细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测转染前后EJ细胞USP22 mRNA的表达水平变化,比较USP22 siRNA与USP22 aiRNA对USP22基因沉默效率及特异性的差异.结果 浓度为50 nmol/L的15/21 USP22 aiRNA能明显抑制EJ细胞中USP22基因mRNA的表达,转染48 h后USP22 mRNA的表达水平下降到最低[（8.30±1.68）%,P＜0.05],且其沉默效率和特异性明显优于USP22 siRNA.结论 以非对称小RNA干扰技术为基础设计的USP22aiRNA能够有效沉默USP22基因,并且降低了非特异性的脱靶效应,减少了受RNA干扰中的＂饱和机制＂及＂竞争机制＂的影响,弥补了传统siRNA的一些不足.