摘要：目的研究溴氰菊酯（DM）对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞活性氧（ROS）生成的影响。方法对培养的PC12细胞分别进行处理：（1）终浓度为0、10和100μmol／L的DM分别处理PC12细胞1、6和12h（两因素析因设计）；（2）终浓度为0、10和100μmol／L的DM分别处理PC12细胞1、6、24h或24、48h；（3）PC12细胞分别在终浓度为10mmol／L乙酰半胱氨酸（NAC）预处理2h、终浓度为500μmol／L的DL-甲硫氨酸磺酰亚胺（BSO）及终浓度为40μmol／L的叔丁基对苯二酚（tBHQ）预处理16h，再给予10μmol／L DM作用6h。所有处理结束时，用2’，7’-二氯荧光黄双乙酸酯（DCFH-DA）探针法测定细胞ROS含量。结果DM诱导ROS生成呈剂量和时间效应关系。10μmol／LDM处理组PC12细胞增加ROS的DCF荧光强度，是溶剂对照组的2．24倍，差异有统计学意义（P〈0．01）。而分别用NAC、BSO及tBHQ预先处理PC12细胞均能明显降低DM所增加的ROS，分别是DM组的22％、62％、38％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论DM能诱导PC12细胞ROS生成增高，胞内巯基水平和抗氧化功能降低可能是ROS生成增高的影响因素。

摘要：背景:星形胶质细胞是中枢神经系统中分布最广泛的细胞之一,但其在中枢神经退行性疾病中的作用目前尚未明确。目的:观察脂多糖对星形胶质细胞内钙离子、活性氧、一氧化氮水平和细胞存活率的影响。设计:观察对比实验。单位:苏州大学附属第二医院脑循环研究室。材料:实验于2005-05/2005-08在苏州大学附属第二医院脑循环研究室完成,选择8只新生1～3d内SD乳鼠,雌雄不限,由苏州大学动物中心提供,[许可证号:SYXK(苏)2002-0037];脂多糖(Sigma公司),MTT和一氧化氮测定试剂盒(碧云天生物技术有限公司)。方法:参照***等人的方法体外分离培养新生大鼠皮质星形胶质细胞,经反复传代培养和纯化后,根据加入脂多糖剂量的不同将星形胶质细胞分为5组:空白对照组、脂多糖5mg/L组、脂多糖10mg/L组、脂多糖20mg/L组和脂多糖40mg/L组,脂多糖对星形胶质细胞的作用时间为30min和60min。MTT法测脂多糖作用细胞30min和60min细胞存活率;Griess法测量脂多糖作用细胞30min上清液一氧化氮的含量;采用激光共聚焦显微镜观察不同剂量脂多糖作用细胞30min对离体大鼠星形胶质细胞内钙离子、作用细胞60min时活性氧水平的影响,采用相对荧光强度百分比表示星形胶质细胞内钙离子浓度的变化及细胞释放活性氧的水平。主要观察指标:各组星形胶质细胞存活率;星形胶质细胞上清液中一氧化氮的含量;激光共聚焦显微镜下星形胶质细胞内游离钙和活性氧水平的变化。结果:①脂多糖作用星形胶质细胞60min时,脂多糖5mg/L,10mg/L,20mg/L组的细胞存活率均升高,与对照组相比差异均有显著性(P<0.05),脂多糖10mg/L组的细胞存活率高于脂多糖5mg/L组和脂多糖20mg/L组。②脂多糖40mg/L作用细胞30min后引起一氧化氮水平的升高,与对照组和其余3个剂量组相比差异有显著性(P<0.05)。③脂多糖5mg/L,10mg/L,20mg/L组细胞内游离钙的相对荧光强度是其相应的基础状态的200～400倍,脂多糖40mg/L组的荧光强度是其相应的基础状态的1000倍作用;④脂多糖5mg/L,10mg/L组,20mg/L组的活性氧水平是其基础状态的200～300倍,而脂多糖40mg/L组的绝对荧光强度峰超过了检测的范围,推测脂多糖40mg/L组的活性氧水平至少是相应基础状态的300～400倍。结论:脂多糖作用于星形胶质细胞后可使其胞钙离子浓度升高,活性氧和一氧化氮释放增加,促进细胞增殖。