摘要：目的 :设计DNA微阵列并利用其研究中药抗肿瘤的分子机制。方法 :制备了包含有与细胞周期和DNA损伤调控检测相关的 2 4个基因的cDNA微阵列 ,选择了本实验室已证明对肝癌细胞有抑制效果的中药 ,通过流式细胞仪检测其对细胞周期的影响 ,提取药物作用后的RNA ,反转录后标记探针与微阵列杂交 ,检测中药作用细胞后对细胞周期及损伤检测相关基因转录的影响。结果 :4种中药作用SMMC 772 1后 ,细胞周期基因和损伤检测点基因均有不同程度改变 ,表现为部分上调 ,部分下调 ,这些和流式细胞术检测的结果是相符合的。结论

摘要：背景:通痹灵是由《金匮要略》中桂枝芍药知母汤加减而成,运用于临床治疗类风湿关节炎已十多年,拟从白细胞介素2及白细胞介素2受体α链(CD25)的角度,从体内和体外两个方面,阐明其调控细胞免疫以及抗类风湿关节炎的作用机制。目的:从体内体外两个方面,研究通痹灵对于胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜原代细胞分泌白细胞介素2,以及通痹灵总碱对于白细胞介素2受体的α链CD25表达的影响。设计:以实验动物为研究对象的完全随机设计,对照实验研究。单位:一所大学的金匮教研室,及另一所大学的生命科学院组织移植与免疫中心。材料:实验于2001-04/07在广州中医药大学第一附属医院中心实验室完成。清洁级Wistar大鼠36只,雄性,购自中山大学医学院实验动物中心,动物合格证号2000A050。体质量(110g±20)g。分为正常组,造模组,甲氨喋呤高剂量组,甲氨喋呤低剂量组,复方通痹灵高剂量组,复方通痹灵低剂量组,每组6只。方法:体内实验,采用胶原诱导性关节炎大鼠动物模型,容积法测量足肿胀度,原代滑膜细胞培养,放免法检测培养液上清,观察通痹灵对滑膜内白细胞介素2的影响;体外实验,分离大鼠淋巴细胞,佛波醇酯或刀豆蛋白体外刺激,双色免疫荧光标记,流式细胞仪检测,观察通痹灵总碱对CD3+,CD25+表达的影响。主要观察指标:复方通痹灵?

摘要：目的研究小干扰RNA(siRNA)对bcl-2基因表达的抑制作用。方法利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA,通过脂质体将合成的siRNA转入A549和NCIH460细胞株,以未转染细胞和转染bcl2的反义药物G3139为对照,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制,RTPCR检测bcl2mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变和bcl-2蛋白表达,反应siRNA对bcl-2表达的抑制效应。结果siRNA组与对照组细胞存活率各时间点均有显著差异(P0.05)。转染12h后,siRNA组bcl-2mRNA与对照组和反义组有显著差异(P<0.05)。转染48h后,siRNA组bcl2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组和反义组细胞阻滞于S期。结论体外转录合成的siRNA可抑制A549和NCIH46细胞bcl2基因的表达,效率可达50%以上。

摘要：目的研究手术创伤对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白2(MD2)表达的影响及其临床意义。方法设计自身配对实验,采集12例手术患者外周静脉血;用密度梯度离心法和黏附洗脱法分离单核细胞,用流式细胞仪检测单核细胞TLR4和MD2的表达;血浆脂多糖(LPS)、血浆TNFα和IL10,以及血浆TLR4和MD2含量分别用鲎试剂法、放免法和ELISA法检测。结果单核细胞TLR4和MD2在术后第1～3天显著上调表达(P0.05);血浆IL10于术后第3天显著升高(P0.05)。结论手术创伤早期可导致TLR4/MD2上调表达,致机体敏感性增强;此后血浆抑制性介质IL10和MD2升高并产生免疫抑制效应。这种双向性变化可能是大手术后全身炎症反应综合征(SIRS)和脓毒症发生的分子机制之一。

摘要：目的运用RNAi技术,研究使bcr-abl基因沉默后相关基因表达变化。方法针对bcr-abl基因的融合位点设计siRNAs,用脂质体法转染K562细胞,进行细胞计数及流式细胞仪检测,观察干扰效果,应用RT-PCR检测相关基因表达变化。结果转染组与对照组相比,细胞数减少,有明显的细胞凋亡,bcr-abl,N-ras,c-myc基因的mRNA表达量降低。结论运用RNAi技术,可以有效地诱导细胞凋亡,抑制相关基因的表达,为研究CML的发生机制奠定基础。

摘要：目的研究 siRNA(small interfering RNA)对人急性单核细胞白血病 THP-1的 MLI-AF9融合基因的影响。方法选择 THP-1细胞特有的 MLL-AF9 融合基因为靶基因,设计并合成 siRNA 片段。以人急性单核白血病细胞系THP-1为靶细胞,应用脂质体转染方法,将 siRNA 导入细胞。通过 Hoechst33258染色观察 siRNA 作用于 THP-1中出现凋亡小体的情况,流式细胞仪检测细胞周期的改变,

摘要：目的 构建mU6启动子驱动的，在真核细胞内表达短发夹状RNA(short hairpin RNA，shRNA)的质粒载体；以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein，GFP)为靶点观察该载体介导的RNAi效应。方法 从已知质粒中获取mU6启动子，经亚克隆后替换pcDNA3质粒中的CMV启动子，构建成pmU6质粒；设计并构建能表达针对GFP的shRNA的重组质粒，与表达GFP的质粒共转染细胞，用流式细胞仪检测GFP的表达水平。结果 表达shRNA的pmU6质粒载体转染细胞后抑制了细胞中GFP的表达，针对GFP基因不同位点的shRNA的RNAi效应差异很大。结论 pmU6质粒载体能介导RNAi效应，该载体可作为RNAi用于基因功能和基因治疗研究的有用工具。

摘要：背景几种减少输注血小板传播病原体的方法正在研究之中。研究设计与方法一种新的除去病原体的技术是以核黄素加上6.2和12.3J/ml的光照(Mirasol PRT)为原理,本研究的目的在于评估处理后浓缩血小板的功能和生化特性。用Mirasol PRT处理单采浓缩血小板,22℃保存。用流式细胞仪检测血小板的主要糖蛋白(GP1b、GPⅣ和GPⅥb-Ⅲa)、VWF、纤维蛋白原(Fg)、纤维结合蛋白、激活的抗原(P-选择蛋白与LIMP)、细胞调亡标志(锚结合蛋白V和FVa)的变化。用公认的灌注模型评估血小板的粘连与聚集功能。[第一段]

摘要：目的：分离小鼠脾脏CD8α＋树突状免疫细胞（LDC）的特异基因，了解这些基因与抗原递逞功能的哭系。找到LDC的特异表面标志和特异功能基因。利用LDC特异基因产物作为自身免疫疾病、病毒性疾病和肿瘤的免疫治疗手段，从中筛选出有效的候选药物。方法：从60只小鼠脾脏LDC中纯化出10ug左右的总RNA，以对应的MDC细胞RNA为对照，采用减数抑制杂交法（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）建立了特异性针对LDC的减数cDNA文库。从该文库中克隆了100多个序列，从中筛选出LDC特异的14个基因，用半定量PCR证实这些基因在LDC中高表达，而在MDC中则表达较低。体外实验采用DC细胞系DC2．4来验证从LDC文库中分离的基因能够在该细胞系表达。21个序列的RT-PCR结果阳性。为了解基因在DC中的作用，选择了12个基因进行RNA干扰实验。设计出特异的siRNA，插入到载体pSilencer1．0内，转化后酶切鉴定并测序，然后将siRNA质粒分别电转化到DC2．4细胞，经G418持续筛选，再用稀释法挑单克隆培养，每个基因最少挑6个以上的单克隆细胞扩大培养。最后用RT-PCR和实时PCR鉴定6个克隆的基因抑制率。挑选抑制率在80--90％以上的siRNA亚克隆细胞系进行基因功能鉴定。功能鉴定采用的是抗原递逞实验，将siRNA亚克隆细胞，DC2．4细胞和空质粒转化的DC2．4细胞分别与OVA可溶性抗原，吸附在乳胶颗粒表面的OVA抗原，乳胶颗粒和空白对照等培养过夜，用针对OVA抗原的25D1．16等单抗标记细胞，用流式细胞仪检测DC细胞表面的OVA抗原等。体内功能实验方法是，将这些克隆与病毒培养后，输入小鼠体内，用流式细胞仪检测受DC递逞的病毒抗原刺激后小鼠T细胞产生1，干扰素的能力。结果：基因14、79、94等的siRNA亚克隆细胞的25D1．16的表达明显低于对照细胞（P〈0．01）。基因14等的siRNA亚细胞克隆刺激小鼠T细胞产生干扰素的能力显著降低（P〈0．01）。结论：基因14、79、94等和LDC的抗原递逞功能密切有关，使用这些基因的siRNA可以降低LDC的免疫功能，具有免疫治疗功效，是良好的治疗自身免疫耐受，减少移植物免疫排斥的候选药物。相反，运用这些基因和其产物可以提高细胞免疫功能，对肿瘤治疗具有价值。