摘要：目的将逆转录(RT)、多重交叉置换扩增(MCDA)以及基于纳米颗粒的测流生物传感器(LFB)结合在一起,建立一种快速检测H5N1禽流感病毒的新方法。方法根据H5N1禽流感病毒中血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的特异性基因序列分别设计一套MCDA引物组。实现在一个反应体系中对目的基因HA和NA的逆转录和MCDA扩增,最终检测结果通过LFB显示。此方法被命名为H5N1-RT-MCDA-LFB。优化H5N1-RT-MCDA-LFB方法的最佳反应条件,同时评价此方法的敏感度和特异性。结果H5N1-RT-MCDA-LFB方法在恒温65℃下孵育40 min便可实现良好的扩增效果。该方法的检测下限为100 fg/反应,检测敏感度比实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)(检测下限为10 pg/反应)高100倍。该方法在对除H5N1禽流感病毒以外的其他28种常见病毒、支原体、衣原体、细菌和真菌的检测中均为阴性。除此之外,H5N1-RT-MCDA-LFB方法在模拟临床样本中得到较好的验证,其检测下限为1×10^(2)拷贝/ml。结论H5N1-RT-MCDA-LFB方法具有简便、快速、敏感度和特异性高等特点,是一种有效检测H5N1型禽流感病毒的分子诊断技术。

摘要：目的 通过对银翘散各配伍与抗流感病毒药效之间关系来探讨其配伍规律.方法 用流感病毒滴鼻造成小鼠感染模型,以小鼠肺组织中病毒的血凝滴度作为观察指标,运用正交设计方法 ,观察银翘散各配伍与药效之间的关系.结果 银翘散降低流感病毒感染小鼠肺组织匀浆血凝滴度的必要因素有连翘、金银花、牛蒡子、荆芥穗、竹叶、生甘草、桔梗、薄荷,而淡豆豉的作用不明显（P＞0.05）.连翘与金银花、连翘与牛蒡子、连翘与荆芥穗、牛蒡子与薄荷、荆芥穗与桔梗有交互作用.结论 从降低流感病毒滴鼻感染小鼠肺组织匀浆血凝滴度的角度看,银翘散最佳组合为连翘2,金银花2,牛蒡子2,荆芥穗1,竹叶2,生甘草2,桔梗1,薄荷2,淡豆豉1.

摘要：目的了解镇江地区甲型H1N1流感病毒流行和变异特点。方法收集2014-2016年镇江地区哨点医院流感样病例标本,进行核酸检测和病毒分离。在病毒流行期按月随机抽取13株甲型H1N1毒株,设计特异性的引物扩增血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,进行测序并分析其遗传进化特征。结果 13株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.3%~100.0%和96.6%~100.0%;NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为95.6%~97.5%和93.8%~96.6%。系统进化分析表明,13株病毒HA和NA基因分属于不同的进化谱系。分子特征表现为12株HA氨基酸序列均发生了抗原位点Sa区K173Q突变,1株同时发生了Sa区K181E突变;3株还发生了Ca1区V183I突变。受体结合位点和糖基化位点的氨基酸序列均未发生变异。结论 2014-2016年镇江地区甲型H1N1流感病毒与疫苗株相比,其HA、NA基因出现了一定程度的变异,但是抗原性并未发生改变,需进一步加强监测。

摘要：目的建立一种早期快速检测甲型(H1N1)(2009)流感流行病毒株的方法。方法将2009年分离的甲型(H1N1)流感流行病毒株基因与以前的流感病毒株进行序列比对,找出其特异的基因序列,设计针对甲型(H1N1)(2009)流行株的血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)基因的三对特异引物,采用RT-PCR同时扩增三条目的片段,通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果此方法对临床标本的阳性检出率为71%。结论采用三重PCR同时扩增甲型(H1N1)(2009)流感流行病毒的三段特异序列既缩短检测时间又提高了检测特异性,无交叉反应,是一种有效可行的快速检测甲型(H1N1)(2009)流感流行病毒株的方法。

摘要：目的:设计流感病毒A诊断芯片的寡核苷酸(O ligo)探针。方法:利用BLAST软件对流感病毒A的基因序列进行比对,得到有意义的特异序列;用生物学软件Array Designer4.2设计特异性高、Tm值相近、长度均一的O ligo探针。结果:获得10条30 m er的O ligo探针。结论:利用BLAST软件和生物学软件Array Designer4.2设计流感病毒A诊断芯片的探针,可为后期打印成基因芯片,用于流感病毒A的检测打下基础。

摘要：目的 探讨影响甲型H1N1流感家庭内传播的危险因素,为制定防控策略提供理论依据.方法按1：2的病例对照研究设计,通过＂疾病监测信息报告管理系统＂在北京市范围内选择符合条件的出现二代病例的家庭作为病例组,调查该家庭中的首发病例和二代病例;而未出现二代病例的家庭且与病例组中的病例相匹配的家庭作为对照组,调查确诊病例和与确诊病例接触频率最高的一位家庭成员.通过问卷调查,收集家庭成员的基本信息、发病及就诊情况和生活方式等.运用条件logistic回归方法分析家庭内感染甲型H1N1流感的危险因素.结果 单因素条件logistic回归分析结果显示,二代病例的文化程度、家庭人口数、家庭人均居住面积、首发病例就诊时间、最近1个月内是否出现流感样症状、是否与原发病例居住在同一房间、是否开窗通风、是否有勤洗手的习惯以及是否接种甲型H1N1流感疫苗等与感染甲型H1N1流感病毒有关.多因素条件logistic回归分析结果表明,二代病例的文化程度（OR=0.42）、是否与原发病例居住在同一房间（OR=3.29）、是否开窗通风（OR=0.28）、是否有勤洗手的习惯（OR=0.71）及是否接种甲型H1N1流感疫苗（OR=0.05）等因素与感染甲型H1N1流感病毒有关.结论 主动接种甲型H1N1流感疫苗、隔离传染源、定期开窗通风及注重个人卫生是控制甲型H1N1流感家庭内传播的重要手段.

摘要：目的了解北京市甲型H1N1流行性感冒（简称流感）轻症与重症患者流感病毒的全基因组特性。方法选取北京市甲型H1Nl流感检测网络实验室于2009年6—12月在北京市定点医院采集的流感病例咽拭子标本作为研究对象，共21份，包括重症病例标本10份（其中有4份标本来源于死亡病例），轻症病例标本11份。由咽拭子标本中提取病毒核酸，设计基因组全长扩增引物，病毒核酸逆转录后进行PCR，对PCR产物测序，通过序列分析软件，分析病毒各基因进化和氨基酸变异情况。结果2009年北京市流行的甲型川Nl流感病毒8个基因节段与疫苗株A／California／07／2009（HlNl）相比，核苷酸同源性高达99％以上，未发生较大变异，其中，血凝素蛋白（HA）、神经氨酸酶（NA）、核蛋白（NP）基因的遗传距离相对较长，分别为0．0050，0．0040，0．0040；HA基因的P83S、1321V，NA基因的N248D，多聚酶（PA）基因的P224S，NP基因的V100I、L122Q变异在所有样本中均发生。重症病例的HA、NA、M、朋、多聚酶（PB2）、非结构蛋白（NS）基因具有明显基因进化聚集性；HA基因的S128P和$203T、PA基因的R269K和D547E、PB2基因的T588I、NS基因的1123V变异主要发生在重症病例中，分别有6、9、6、7、9、6例；其中HA基因的S203T、PA基因的R269K及D547E变异与重症病例的相关性具有统计学意义（P〈0．05）。HA基因变异主要分布在ca与cb抗原决定簇上，NA基因上无耐药突变，膜蛋白（M2）基因均发生耐药性突变，其余毒力相关基因未见突变。结论2009年北京市甲型HlNl流感病毒与疫苗株A／California／07／2009（H1N1）同源性较高，发现与重症及死亡病例相关的突变位点，未发现毒力基因突变。

摘要：由甲型H1N1流感病毒引起的急性呼吸道传染病,目前正在全球持续快速蔓延.据世界卫生组织通报,截至9月3日,全球188个国家和地区报告了约25万例确诊病例,其中死亡人数达2 837例.世界卫生组织还估计,未来2 a内全球感染甲型HlNl流感的人数可能多达20亿,占全球总人口的三分之一.

摘要：目的建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒（简称流感）病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法。方法2010年10月至2011年4月，采集流感样患者咽拭子样本213份。分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因中的152、128和107bp片段作为荧光定量PCR检测的靶片段，设计特异性引物和不同发光基团标记的TaqMan探针，采用体外转录构建标准品，绘制标准曲线，评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度，并对213份流感样患者咽拭子样本进行检测及测序验证。结果3种病毒对应的标准曲线分别为：新甲型H1N1流感病毒：Y=-3．461gX＋46．985；甲型流感病毒：Y=-3．491gX＋37．709；乙型流感病毒：Y=-3．51lgX＋38．889，Y为Ct值，lgX为病毒RNA拷贝数的对数值。质粒标准曲线的方差系数为0．998，灵敏度达到每个反应10^2拷贝／μl，特异度强。213份样本中检出新甲型H1N1流感病毒核酸39份（18．3％），甲型流感病毒核酸阳性63份（29．6％），乙型流感病毒核酸阳性23份（10．8％），阳性样品经过测序验证。结论为鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流感病毒建立的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏。

摘要：目的及时总结经验，为季节性流行性感冒（简称流感）暴发时期开展甲型H1N1流感防控提供参考。方法2009年5月25至31日，我国内地发生首起甲型H1N1流感输入性患者引起社区续发患者（1例输入性患者，2例社区续发患者）。在患者的密切接触者中，出现发热（体温≥37．5℃）或咳嗽、咽痛等呼吸道症状，经实验室检测排除甲型H1N1流感病毒感染，而本人或本人的密切接触者中检测季节性流感阳性结果的患者14例。以疾病预防控制专业人员面对面访谈和电话调查相结合的方式，收集患者个案信息。了解62名相关密切接触者的基本情况。对14例患者咽拭子进行甲型H1N1流感检测，采集其中7例患者进行季节性流感排查。结果14例发热患者，发病率在各年龄组[15-岁组19．2％（5／26），25～岁组25．0％（9／36），χ^2=0．287，P=0．592]、性别[男性24．0％（6／25），女性21．6％（8／37），χ^2=0．048，P=0．826]、部门[化妆及设计部、摄影部、门市部及其他、影楼客户分别为42．1％（8／19）、27．3％（3／11）、12．5％（2／16）、6．3％（1／16），χ^2=7．653，P=0．054]和是否居住集体宿舍[集体宿舍33．3％（4／12）、非集体宿舍29．4％（10／34），χ^2=0．699，P=0．403]等方面差异均无统计学意义。14例患者以低热为主（37．5～37．9℃），未发现有腹泻症状的患者，本次暴发中3例甲型H1N1流感患者中1例出现腹泻的症状。14例患者咽拭子检测甲型H1N1流感核酸阴性，7例患者咽拭子检测6例呈甲型季节性流感阳性反应。结论本起事件为我国内地首起社区甲型H1N1流感暴发患者密切接触者中发生季节性流感暴发。提示调查甲型H1N1流感患者时，必要时需排查季节性流感和继续加强季节性流感的防控工作。