摘要：目的:开展基于克隆进化原理的循环肿瘤DNA在晚期前列腺癌临床监测中的探索性应用研究。方法:纳入2例临床特征为低前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen, PSA)且高风险的晚期前列腺癌患者,通过前列腺多区域取材进行DNA测序以构建肿瘤的克隆进化过程;针对肿瘤亚克隆设计循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)探针,结合患者相关临床指标,评估其在晚期前列腺癌治疗监测中的价值。结果:基于克隆进化原理的ctDNA监测可表现出比PSA等传统指标更早的肿瘤进展预警。结论:本研究为晚期前列腺癌患者的疗效监测和长程管理提供了新的可行性。

摘要：基于微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)设计一种检测肠癌游离循环DNA(Circulating cell free DNA,cf DNA)中KRAS(V-Ki-ras2 Kirsten ratsarcoma viral oncogene homolog)基因突变的新方法并评估其灵敏度和准确性。根据肠癌病人KRAS基因的突变类型设计并合成,采用dd PCR扩增并评估其灵敏度和准确性;根据AMRS-PCR引物设计原理设计KRAS基因的实时定量PCR扩增引物并评估其准确性,进而比较dd PCR和q PCR二者之间的优缺点;最后针对52例肠癌病人的cf DNA采用dd PCR进行检测,研究dd PCR在cf DNA KRAS基因突变检测的应用。成功使用dd PCR和q PCR两种方法对KRAS野生型及7种突变型建立检测方法,使用质粒标准品及实际样品验证该两种方法可行并对其假阳性率、线性范围及检测下限等性能进行了评价,最后成功对52例临床患者和20例正常人的血浆cf DNA样本进行检测,临床灵敏度为97.64%,临床特异性为81.43%。dd PCR的检测性能优于q PCR,LOD达到个位数DNA拷贝,最低可确认突变浓度达到0.01%–0.04%。样本提取效率在方法学建立中也十分重要,直接影响到灵敏度和Cut Off值的判定。临床患者检测结果显示其KRAS突变率接近报道水平。