摘要：设计了仪器分析综合实验——液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定毛发中甲基苯丙胺含量。实验内容包括不同前处理方法的操作与对比,毛发中甲基苯丙胺的定性分析、定量测定以及图谱中代谢物等相关信息的发掘与解读。该实验将毒物鉴定技术与LC-MS/MS法结合,学以致用,与前沿和应用接轨。本实验的设立,将加深学生对LC-MS/MS的了解,促进学生构建完整实验体系,增强科研意识与创新能力。

摘要：建立了液相色谱-串联质谱检测广西月柿中187种农药残留的方法。试样采用含1%醋酸乙腈提取,经无水硫酸镁(Mg SO_4)、无水醋酸钠(CH_3COONa)、无水硫酸钠(Na_2SO_4)、N-丙基乙二胺(PSA)和C_(18)萃取净化。以含0.005 mol/L甲酸铵和含0.01%甲酸的95%乙腈水溶液为有机相,含0.005 mol/L甲酸铵和0.01%甲酸的水溶液为水相进行梯度洗脱。使用电喷雾离子源,正离子模式(ESI^+)和动态多反应监测(DM-RM)方式进行扫描检测,基质匹配外标法定量。187种农药在1~100μg/kg范围内线性关系良好,相关系数(r^2)大于0.99;方法检出限(S/N≥3)均为1μg/kg,定量下限(S/N≥10)均为10μg/kg;加标回收率为70.2%~118%,相对标准偏差为2.0%~20%(n=6)。该方法准确、灵敏、快速,适于月柿中农药多残留的高通量检测。

摘要：线粒体作为细胞物质和能量代谢的主要细胞器,在维持细胞生理稳态中发挥关键作用,进而与诸多疾病的发生发展密切相关。从高度复杂的细胞组分中特异性分离分析线粒体,对于其功能解析、分子机制研究和化学干预具有重要意义,但仍存在困难与挑战。本研究以靶向多肽为识别元件,开展了线粒体亲和分离新材料的设计、合成和分析应用研究。以与线粒体膜具有特异性相互作用的线粒体穿透肽(mitochondrial penetrating peptide,MPP)为识别元件,通过引入空间手臂分子,设计合成了多肽亲和配基。以表面富含醛基的聚合物基质微球(matrix beads,MB)为亲和基质,建立了基于胺甲基化反应的多肽功能化亲和微球制备方法,该方法具有修饰反应条件温和、配基修饰效率高的特点。将所构建的亲和微球MB@MPP用于细胞破碎液中线粒体的直接分离,实现了完整线粒体的快速、高选择性和无损捕获。与商品化分离试剂盒相比,MB@MPP捕获的线粒体中标志蛋白富集效率更高,纯度更好。基于多肽功能化微球对线粒体高选择性分离能力,以线粒体代谢所需关键辅酶的前体小分子色氨酸和核黄素为目标,进一步建立了基于液相色谱-串联质谱的线粒体中活性小分子的分析检测方法,实现了激酶激动剂刺激前后线粒体中活性小分子含量及其动态变化分析,为线粒体功能解析和相关疾病分子机制研究提供了方法基础。

摘要：全氟辛酸(PFOA)在自然环境中难以降解,会通过富集渗透污染水体和土壤,从而对自然环境和人体健康造成影响。开发成本低、效率高、环保的吸附剂实现环境水体中PFOA的高效吸附去除是解决PFOA污染的有效途径之一。本研究采用无溶剂一锅法设计、制备了一种含氟富氮多孔有机聚合物(POP-3F),通过引入氟原子增加了材料的疏水性,增加了主客体分子间的疏水作用、氟-氟相互作用,提升了材料对PFOA的吸附效果。使用扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、X-射线衍射仪(XRD)、固体核磁(ssNMR)、X射线光电子能谱仪(XPS)、热分析系统(TGA)等对POP-3F进行了表征。结合液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),研究了POP-3F在不同pH、盐浓度和腐植酸条件下对PFOA的吸附性能。在pH值为2时,POP-3F对PFOA的去除率最高达到98.6%,可用于去除酸性工业废水中的PFOA。并且POP-3F对于PFOA的去除率几乎不受NaCl和腐植酸浓度的影响,在加入NaCl后,POP-3F表面会形成双电层,可以削弱POP-3F与PFOA之间的静电相互作用,去除率仅下降了1%。腐植酸与PFOA存在竞争吸附,在高浓度腐植酸条件下,POP-3F对PFOA的去除率仅下降了0.73%。在最佳pH条件下考察了吸附等温线和吸附动力学,通过数学模型拟合了实验结果,探究了吸附机理。结果显示,POP-3F的理论容量为191 mg/g,高于活性炭和其他多数吸附剂,表现出较高的吸附容量。此外,POP-3F对PFOA的吸附去除几乎不受基质种类的影响,在模拟自然水中吸附效果略有降低(仅降低0.1%),经过5次吸附-解吸循环后,对PFOA的去除率仅微幅下降(降低0.67%),表明其具有循环使用和可再生性,在实际PFOA污染废水处理中具有广阔的应用前景。

摘要：赖氨酸(K)已被广泛用于靶向赖氨酸的交联剂设计、蛋白质复合物的结构解析以及蛋白质-蛋白质相互作用等研究领域。在基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)联用技术的“鸟枪法”蛋白质组学研究中,复杂生物样品中的蛋白质被酶切成上万条肽段,为直接分析含有K的肽段带来了巨大挑战。鉴于目前缺乏针对含K多肽的有效富集方法,本工作发展了一种基于疏水标记试剂C10-S-S-NHS和反相色谱分离的方法(简称HYTARP),实现对复杂样品中含K多肽的高效富集和鉴定。合成的C10-S-S-NHS试剂可以高效标记含不同数目K的标准肽段,且对HeLa细胞蛋白酶解肽段的标记效率高达96%。通过考察标记肽段在反相色谱中的保留行为,发现大部分被标记的含K肽段在流动相中乙腈比例升高至约57.6%(v/v)时开始洗脱。进一步优化色谱洗脱梯度,发现阶梯式洗脱能够实现对复杂样品酶解肽段中标记的K肽段的高效分离和富集。富集后样品中含K肽段的占比>90%,较富集前提高了35%。富集的含K肽段对应蛋白质的丰度动态范围跨越了5~6个数量级,实现了对复杂样品中低丰度蛋白质的鉴定。综上,本工作发展的HYTARP策略为降低样品复杂度、提高含K肽段及低丰度蛋白质的鉴定覆盖率提供了一种简单、高效的方法。

摘要：目的研究受试制剂复方利多卡因乳膏和参比制剂利丙双卡因乳膏在中国健康受试者中的药代动力学特征并评价两种制剂的生物等效性。方法用单中心、单剂量、随机、开放、两周期、双序列和双交叉设计。纳入40例健康受试者,每周期将受试制剂或参比制剂60 g在空腹状态下分别涂抹于双侧大腿前面皮肤(每侧200 cm^(2),共400 cm^(2)),并在给药操作完成后保持药物停留至少5 h。用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定血浆中利多卡因和丙胺卡因的浓度,用WinNonlin 8.0软件计算药代动力学参数,评价两种制剂的生物等效性。结果受试者双侧大腿涂抹受试制剂复方利多卡因乳膏与参比制剂利丙双卡因乳膏后,血浆中利多卡因药代动力学参数:C_(max)分别为(167.27±91.33)和(156.13±66.86)ng·mL^(-1),AUC_(0-t)分别为(1651.78±685.09)和(1636.69±617.23)ng·mL^(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(1669.85±684.65)和(1654.37±618.30)ng·mL^(-1)·h,调整后几何均值比值分别为104.49%、101.88%和101.89%,其90%置信区间分别为98.18%~111.20%、97.80%~106.13%和97.87%~106.07%,均落在80.00%~125.00%。血浆中丙胺卡因药代动力学参数:Cmax分别为(95.66±48.84)和(87.52±39.16)ng·mL^(-1),AUC_(0-t)分别为(790.86±263.99)和(774.14±256.42)ng·mL^(-1)·h,AUC_(0-∞)分别为(807.27±264.67)和(792.84±254.06)ng·mL^(-1)·h,调整后几何均值比值分别为107.34%、103.55%和102.98%,其90%置信区间分别为101.69%~113.31%、99.94%~107.30%和99.65%~106.43%,均落在80.00%~125.00%。结论受试制剂复方利多卡因乳膏和参比制剂利丙双卡因乳膏具有生物等效性。

摘要：目的研究拉莫三嗪片在中国健康受试者中的药代动力学特征,并评价国产拉莫三嗪片受试制剂(T)和原研参比制剂(R)在空腹和餐后条件下的生物等效性及安全性。方法空腹和餐后试验分别入组24例中国健康受试者,空腹试验男性18例,女性6例,餐后试验男性17例,女性7例,采用单中心、随机、开放、单剂量、两制剂两周期两序列交叉的试验设计,受试者单次口服拉莫三嗪片受试制剂或参比制剂50 mg后采集72 h血样,用液质联用法(LC-MS/MS)测定血浆中拉莫三嗪浓度,用WinNonLin 8.1计算主要药代动力学参数并评价2种拉莫三嗪片的生物等效性。结果空腹单次给药拉莫三嗪片受试制剂和参比制剂的C_(max)分别为(910.93±248.02)和(855.87±214.36)ng·mL^(-1),t_(max)分别为0.50(0.25,4.00)和1.00(0.25,3.50)h,t_(1/2)分别为(36.1±9.2)和(36.0±8.2)h,AUC_(0-72 h)分别为(27402.40±4752.00)和(26933.90±4085.80)h·ng·mL^(-1)。餐后单次给药拉莫三嗪片受试制剂与参比制剂的C_(max)分别为(701.62±120.67)和(718.95±94.81)ng·mL^(-1),t_(max)分别为4.00(1.00,5.00)和4.00(0.50,5.00)h,t_(1/2)分别为(44.2±12.4)和(44.0±12.0)h,AUC_(0-72 h)分别为(30253.20±7018.00)和(30324.60±6147.70)h·ng·mL^(-1)。空腹试验和餐后试验受试制剂/参比制剂的拉莫三嗪主要药代动力学参数经对数转换后几何均值比(90%CI)均落在80.00%~125.00%,服用2种拉莫三嗪片均未发生严重不良反应,安全性良好。结论2种拉莫三嗪片在空腹和餐后状态下在中国男性和女性健康受试者体内生物等效、安全。

摘要：建立同位素稀释液相色谱串联质谱法同时测定保健食品中1-甲基咪唑、2-甲基咪唑和4-甲基咪唑的准确定性定量方法。保健食品加入3种甲基咪唑类化合物对应同位素内标后,使用三氯乙酸溶液提取和除杂,使用阳离子固相萃取柱净化后,待测液经过超高效液相色谱分离,三重四级杆质谱定性分析,同位素内标法定量。在最优化实验条件下,3种甲基咪唑类化合物检出限为10μg/kg,在浓度10~500ng/mL呈现良好线性关系,线性相关系数均大于0.999。

摘要：建立了液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定花椒及其制品中羟基-α-山椒素的分析方法。样品经70%甲醇水溶液超声提取2次,每次10 min,以0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相梯度洗脱,经C18色谱柱分离,正离子模式扫描,多重反应监测模式检测。以保留时间和特征离子对(母离子和两个碎片离子)信息比较进行定性,外标法定量。结果表明:在2~500 ng/mL范围内,羟基-α-山椒素的线性回归方程相关系数为0.999;样品添加不同浓度梯度的标准溶液,平均回收率在80.8%~94.4%,相对标准偏差(RSD)在0.8%~4.9%。当样品称取为1 g,定容体积为25 mL时,检出限(LOD)为0.05 mg/kg,定量限(LOQ)为0.1 mg/kg。该方法高效快捷、准确度和精密度满足检测要求,能准确测定羟基-α-山椒素的含量,可为花椒及其制品的质量控制提供参考依据。

摘要：为了探究甲醛对甲醛裂合酶的影响及导致该酶失活的原因,将甲醛裂合酶与不同浓度甲醛溶液(300 mmol/L和1 mol/L)孵育不同时间(1 h、2 h和3 h)后检测该酶的活性,再将孵育后的甲醛裂合酶进行液相色谱–串联质谱(LCMS/MS)检测,分析甲醛对该酶的修饰/交联位点。结果表明:在甲醛溶液中孵育后的甲醛裂合酶存在明显的交联和结构修饰现象,且甲醛浓度越高孵育时间越长,酶的交联程度越高;使用LC-MS/MS分析确定了甲醛裂合酶N186、K228两个甲醛修饰位点以及潜在的甲醛交联片段。甲醛分子通过与天冬酰胺、赖氨酸等氨基酸发生交联反应,破坏其局部结构并改变整体的聚集状态,从而使其失活。本研究为提高甲醛裂合酶的甲醛耐受性提供了潜在半理性设计的改造位点和思路。