摘要：背景:研究表明,淀粉样β蛋白42疫苗接种可以诱导阿尔茨海默病转基因小鼠产生特异性抗淀粉样β蛋白42抗体,清除其脑内的淀粉样β蛋白沉积,改善其学习记忆能力,在对阿尔茨海默病的防治中具有良好的应用前景。目的:研究淀粉样β蛋白42及其亚单位肽疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的影响。设计:以动物为研究对象,完全随机分组实验。单位:一所大学医学院人体解剖学教研室脑研究室。材料:实验于2003-04/2004-02在中山大学实验动物中心和人体解剖学教研室脑研究室进行。5月龄APPSWE转基因小鼠32只,购自美国Taconiccompany,在本室繁育成功。实验随机分成对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组,每组8只。干预:淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗配伍MF59佐剂,基础接种采用皮下注射,加强接种采用鼻黏膜免疫,共接种8个月。疫苗接种前用Y迷宫作行为学测试,接种后用Morris水迷宫作行为学测试。主要观察指标:空间学习记忆能力,平均逃避潜伏期,穿过平台次数,第一象限游泳距离百分率,20%边缘区游泳距离百分率。结果:疫苗接种前对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组APPSWE转基因小鼠Y迷宫作行为学测试10次中正确反应的次数分别为7.50±0.81,7.06±0.

摘要：背景:淀粉样β蛋白是阿尔茨海默病致病关键因素之一。近来的研究证明在成人中枢神经系统内存在能不断自我更新、多向分化潜能、终身神经修复的神经干细胞。但是在阿尔茨海默病脑内却未见到这些神经前体细胞的起到有效作用,其机制尚未清楚。淀粉样β蛋白1～40是否通过c-Jun氨基端激酶信号转导通路对胚胎大鼠皮质神经前体细胞造成神经毒性损害尚不清楚。目的:体外实验淀粉样β蛋白1～40对胚胎中皮质神经前体细胞毒性作用中c-Jun氨基端激酶信号转导通路的可能作用机制,探讨c-Jun氨基端激酶抑制剂SP600125对淀粉样β蛋白1～40致胚胎中皮质神经前体细胞神经毒性作用的保护作用。设计:以细胞为观察对象,随机对照实验。单位:中国医科大学附属第一医院神经内科。材料:实验于2005-05/10在中国医科大学中心实验室完成。选用10只孕14dWistar大鼠,取其胚胎以备实验。方法:取Wistar大鼠胚胎脑皮质组织神经前体细胞,体外培养、传代、鉴定。将生长状态良好的胚胎大鼠皮质神经前体细胞随机分为4组:淀粉样β蛋白1～40组(每孔加入10nmol/Lβ淀粉样蛋白1～40);SP600125+淀粉样β蛋白1～40组(每孔先加入10μmol/LSP600125培养30min后再加入10nmol/L淀粉样β蛋白1～40);SP600125组(每孔加入10μmol/LSP600125培养);生理盐水组(每孔加入等体积的生理盐水),每组分别培养0,2,4,6,12,24h,每个时间点设8个孔。采用α甲基偶氮唑蓝法测定细胞生存率。流式细胞分析术检测细胞凋亡率。免疫印迹法检测c-Jun氨基端激酶,p-c-Jun氨基端激酶,c-Jun,p-c-Jun表达。计量资料差异比较采用t检验。主要观察指标:①Wistar大鼠胚胎皮质神经前体细胞细胞生存率。②胚胎中皮质神经前体细胞细胞凋亡率。③胚胎中皮质神经前体细胞c-Jun氨基端激酶,p-c-Jun氨基端激酶,c-Jun,p-c-Jun表达结果。结果:①淀粉样β蛋白1～40组和SP600125+淀粉样β蛋白1～40组细胞生存率随培养时间延长而下降,4h时下降最明显;培养0,2,4,6,12,24h时淀粉样β蛋白1～40组明显低于其他3组(P0.05)。②淀粉样β蛋白1～40组和SP600125+淀粉样β蛋白1～40组细胞凋亡率随培养时间延长而上升,4h时上升最明显;培养0,2,4,6,12,24h时淀粉样β蛋白1～40组明显高于其他3组(P0.05)。③淀粉样β蛋白组:c-Jun氨基端激酶和c-Jun在培养0,2,4,6,12,24h均有表达,但无变化;p-c-Jun氨基端激酶和p-c-Jun在淀粉样β蛋白1～40作用0h时即有表达,逐渐增高,4h时达高峰,以后逐渐减少。结论:淀粉样β蛋白1～40能明显抑制胚胎中皮质神经前体细胞细胞活性,降低细胞生存率,导致细胞凋亡,c-Jun氨基端激酶信号转导通路参与了此过程,这可能是阿尔茨海默病不能启动自我救活机制原因之一;使用SP600125,可抑制c-Jun氨基端激酶和c-Jun激活,明显减轻淀粉样β蛋白1～40对胚胎中皮质神经前体细胞的神经毒性作用。

摘要：背景:淀粉样β蛋白是老年斑的核心成分,其毒性片段淀粉样β蛋白25-35近年广泛用于实验研究中。已往研究表明自制中药复智散可促进培养神经细胞存活,可能具备治疗阿尔茨海默病的效用。目的:研究复智散对抗淀粉样β蛋白25-35对培养神经细胞的毒性作用及其发挥这一作用的可能途径。设计:以细胞为研究对象,重复测量设计。单位:一所大学医院的神经内科和一所大学医院的脑老化重点实验室。材料:实验于2002-06/2003-04在宣武医院北京脑老化重点实验室完成。人多巴胺能神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞。淀粉样β蛋白25-35片段。中药复智散文火煎制,留取上清冷冻抽干配成浓度为0.5g/mL的贮存液备用。抗体:cAMP应答元件结合蛋白、B淋巴细胞白血病-2基因产物中的Bcl-2、细胞色素C由宣武医院北京脑老化研究实验室制备。方法:用不同剂量的淀粉样β蛋白25-35单独或与复智散共同孵育SH-SY5Y细胞,与空白对照组相比,测定在不同孵育条件下培养神经细胞的噻唑蓝代谢率。利用Western-blot法测定复智散单独孵育、淀粉样β蛋白25-35单独孵育及两者共同孵育条件下与空白对照相比蛋白质表达的变化。主要观察指标:各实验组与空白对照组相比的噻唑蓝代谢率。与神经细胞存活及死亡相关蛋白cAMP应答元件结合蛋白。

摘要：背景:许多研究表明淀粉样β蛋白在阿尔茨海默病的发病中起着主要的作用,淀粉样β蛋白的减少将延缓阿尔茨海默病的发展,因此减少淀粉样β蛋白的产生成为干预阿尔茨海默病的一项重要策略。许多阿尔茨海默病患者因精神行为异常而接受抗精神病药物治疗,非典型抗精神病药物奥氮平与喹硫平能够明显地改善阿尔茨海默病患者临床整体印象评分,早期开始的长期干预能够改善患者预后。目的:观察奥氮平与喹硫平对双转染(瑞典淀粉样β蛋白前体蛋白基因和早老素1基因)鼠成神经瘤细胞分泌淀粉样β蛋白42的作用。设计:以细胞为研究对象,完全随机分组设计,对照实验研究。材料:所有研究工作均在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所进行。鼠N2a成神经瘤细胞与双转染N2a细胞由康奈尔大学医学院神经病学及神经科学系提供。干预:双转染N2a细胞分别予200μmol/L奥氮平及50μmol/L喹硫平处理24h后,应用酶联免疫吸附反应法测定细胞内外淀粉样β蛋白的水平。应用四甲基偶氮唑盐方法检测细胞活性、BCA法测定细胞的蛋白质含量、免疫印迹检测N2a与双转染N2a细胞淀粉样β蛋白前体蛋白的表达、酶联免疫吸附法测定双转染N2a细胞分泌到培养液及细胞内的淀粉样β蛋白42水平。主要观察指标:测定双转染N2a细胞分泌到培养液及细胞内的淀?

摘要：目的:确认国内成人血清淀粉样β蛋白1～28生理参考值范围,为研究淀粉样β蛋白1～28与老年性痴呆的关系奠定基础。方法:选择2001-06/2003-06解放军总医院健康献血者、查体者、门诊和住院智能正常成人人群335例,采用平衡饱和竞争放射免疫分析法,检测智能正常成人中血清淀粉样β蛋白1～28含量,其中青年组(年龄20～35岁)100例、中年组(年龄36～59岁)100例、老年组(年龄60～79岁)100例与高龄老年组(年龄80～94岁)35例,所有数据均经SPSS8.0软件进行统计学处理,首先对实验所得4组数据进行F检验,后对4组间数据两两进行了t检验,同时又对4组实验所得数据淀粉样β蛋白1～28含量与年龄进行了相关与回归分析。结果:实验设计要求的青年组100例、中年组100例、老年组100例与高龄老年组35例共335例受试者全部进入结果分析,没有脱落。①国内成人血清淀粉样β蛋白1～28生理参考值范围为0.30～1.12μg/L。②老年人群中血清淀粉样β蛋白1～28生理参考值范围为0.25～1.11μg/L。③血清淀粉样β蛋白1～28含量与年龄无相关性(r=-0.0154,P>0.05)。结论:血清淀粉样β蛋白1～28含量与年龄无直接关系,淀粉样β蛋白1～28可作为老年性痴呆研究中的参考指标。

摘要：背景:淀粉样β蛋白沉积是引致阿尔茨海默病的重要原因,淀粉样β蛋白前体基因过度表达或某部分发生突变,可能与阿尔茨海默病的发生有关。目的:观察沂蒙山区阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白及其前体基因的关系。设计:病例-对照分析。单位:临沂市人民医院神经内科。对象:选择临沂医专附属临沂市人民医院神经内科2001-01/2003-12住院阿尔茨海默病患者32例,以性别、年龄相当的非颅脑损伤的外科手术老年人30例为对照组(简易精神状态量表评分>27分)。方法:应用ELISA法检测脑脊液淀粉样β蛋白水平,应用荧光定量聚合酶链反应技术检测淀粉样β蛋白前体基因表达量。结果:62例全部进入结果分析。①阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白水平明显高于对照组[(13.63±9.34),(6.75±5.37)μg/L,t=3.354,P<0.01]。②阿尔茨海默病组脑脊液淀粉样β蛋白前体表达量明显高于对照组[(1624±298),(1275±269)拷贝/μL,t=4.42,P<0.01]。③阿尔茨海默病组淀粉样β蛋白水平与淀粉样β蛋白前体基因表达量呈正相关(r=0.44,P<0.01)。结论:沂蒙山区阿尔茨海默病患者脑脊液中淀粉样β蛋白及其前体基因表达增高,且淀粉样β蛋白水平越高,其前体基因表达越高,痴呆程度越重。提示阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白、淀粉样β蛋白前体密切相关。但淀粉样β蛋白前体表达量在阿尔茨海默病诊断中不具特异性。

摘要：背景:葛根素是中药葛根的主要有效成分,能对抗东莨菪碱、D-半乳糖等因素引起的动物学习记忆障碍。目的:探讨葛根素对淀粉样β蛋白所致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的保护作用及脑和血中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量的变化。设计:随机对照实验。单位:首都医科大学药理学系。材料:实验于2002-03/06在首都医科大学药理学系完成。实验选用40只ICR小鼠,随机分成4组:假手术组、痴呆模型组、葛根素25mg/kg组、葛根素50mg/kg组,每组10只。方法:①造模:小鼠戊巴比妥钠麻醉,痴呆模型组、葛根素25mg/kg组、葛根素50mg/kg无菌操作下一次性右侧脑室内注射淀粉样β蛋白3μL/只。假手术组操作同模型组,但不注射淀粉样β蛋白。②给药:假手术组、模型组:腹腔注射生理盐水10mL/kg;葛根素25mg/kg组腹腔注射25mg/kg;葛根素50mg/kg组腹腔注射50mg/kg。各组于造模当日开始给药,12d后开始行为学检测。③用Morris水迷宫法检测小鼠学习记忆能力,记录2min内寻找到平台的时间(逃避潜伏期),航行距离,初始角度及搜索策略,作为学习成绩。④小鼠完成上述实验后,乙醚麻醉眼眶取血,制备血清,然后断头处死,迅速取右脑冰浴下制备脑匀浆,检测脑、血清中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量。主要观察指标:①各组小鼠到达平台的逃避潜伏期和游泳距离、搜索策略及初始角度。②各组小鼠脑、血清中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量。结果:40只小鼠均进入结果分析。①葛根素25mg/kg和50mg/kg组逃避潜伏期、航行距离缩短(P0.05)。②葛根素25mg/kg组、葛根素50mg/kg组能使模型小鼠脑及血中超氧化物歧化酶增多、丙二醛的减少(P<0.05～0.01)。结论:葛根素可对抗淀粉样β蛋白的神经毒性,使模型小鼠的学习记忆成绩提高,与剂量无关熏可能与清除脑自由基及提高抗氧化活性作用有关。

摘要：背景:脑中雌激素可调节淀粉样β蛋白前体蛋白的代谢与β淀粉样蛋白的产生。了解雌激素与淀粉样β蛋白前体蛋白代谢以及关键酶淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶的关系,对研究轻度认知障碍、阿尔茨海默病的发病原因具有重要作用。目的:利用大鼠卵巢切除模型观察内外源性雌激素缺乏及补充外源性雌激素对大鼠脑皮质区和海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达以及血清雌激素含量的影响。设计:完全随机对照实验。单位:青岛大学医学院附属医院脑血管病研究所,青岛市市立医院病理科。材料:实验于2003-01/12在青岛大学医学院附属医院脑病防治重点实验室完成。选择健康雌性Wistar大鼠21只,随机分为3组,每组7只。①卵巢切除组:制备大鼠双侧卵巢切除模型。②卵巢切除后补充外源性雌激素治疗组(雌激素组):卵巢切除后给予苯甲酸雌二醇(1mg/kg),每7d皮下注射1次,共4次。③假手术对照组:手术过程与卵巢切除组相同,但不切除卵巢,不补充雌激素。方法:①第28天时,大鼠在麻醉状态下取脑组织备用,制备冠状切片,用于免疫荧光标记细胞化学染色观察。②激光共聚焦显微镜下观察皮质区、海马CA1区红色荧光标记细胞数量。③体内雌激素水平检测:大鼠眼动脉取血1.5mL,离心取上清备用,运用放射免疫法检测大鼠血清中雌激素含量。主要观察指标:①免疫荧光标记细胞化学法观察大鼠脑皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶免疫荧光细胞数的变化。②放免法测量大鼠血清雌激素含量的变化。结果:21只大鼠均进入结果分析。①卵巢切除组大鼠皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶阳性细胞数显著高于对照组和雌激素组[皮质区:(20.00±5.16),(5.71±3.14),(4.00±4.61)个/视野;海马CA1区:(17.14±4.45),(6.85±1.95),(5.14±5.52)个/视野,P均0.05)。结论:采用双侧卵巢切除的方法,造成大鼠体内雌激素缺乏,引起大鼠脑内皮质区、海马CA1区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达增多。给予卵巢切除大鼠补充外源性雌激素,其海马CA1区、皮质区淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达显著减少,说明体内外雌激素含量的变化可影响大鼠皮质和海马区域淀粉样β蛋白前体蛋白β位点裂解酶表达。

摘要：背景:淀粉样β蛋白(amyloidbetaprotein,Aβ)是阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD老年斑的重要组成成分之一,它在脑内的沉积被)认为是AD发病机制的关键步骤,动物试验提示Aβ也参与了血管性痴呆(vasculardementia,VD)的发病过程。但在临床试验中Aβ含量变化是否与VD的发病有关还不清楚。目的:测定脑卒中患者急性期和VD患者血浆Aβ的含量,探讨其在VD发病机制中的作用。设计:病例对照研究。单位:重庆医科大学附属第一医院神经内科和核医学科。对象:2001-09/2002-12重庆医科大学附属第一医院神经内科住院脑卒中急性期患者92例(脑卒中组),脑出血28例,脑梗死64例;病灶在右侧大脑半球的30例,在左侧大脑半球的29例,另33例左右半球均有病灶或病灶在脑干、小脑;病情轻者71例,病情较重者9例,病情重者12例。同期门诊或住院血管性痴呆患者62例(血管性痴呆组)。正常对照组来自重庆市主城区健康志愿者45例。方法:采用平衡饱和竞争放射免疫方法测定正常对照组、脑卒中急性期患者、VD患者血浆中Aβ的浓度,比较各组有无显著性差异,分析不同病因、病变部位、病情严重程度对Aβ的含量的影响。主要观察指标:各组患者血浆中Aβ的含量。脑卒中急性期患者中不同病因、病变部位、病情严重程度的各组患者Aβ的含量。结果:脑卒中患?

摘要：背景:胆碱乙酰基转移酶活性水平的降低和神经递质囊泡膜蛋白的减少是老年性痴呆的主要生化指标,中药补肾益智方具有补肾、益气、生髓、养脑作用,其含药血清能有效地保护由淀粉样蛋白引起的这些改变。目的:观察补肾益智方含药血清能否改善由淀粉样蛋白产物诱导神经细胞显示的老年性痴呆样病理损害,以此评价补肾益智方治疗老年性痴呆的作用。设计:随机对照实验。单位:广西中医学院第二附属医院神经科学研究所,广州中医药大学老年脑病研究所。材料:实验于2003-09/2004-03在广西中医学院新药研究开发中心完成。选取健康清洁级3月龄Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组与中药灌胃组,各30只。补肾益智方主要由枸杞、蛇床子、人参、首乌、丹皮、冰片等组成,临用前配置为成药0.176g/mL(生药1.13g/mL)液体。方法:①中药灌胃组每只大鼠每天灌胃成药液1.0～1.5mL,连续灌胃1个月,于末次给药后4h内,5000r/min离心5min分离血清,无菌过滤,56℃灭活补体,即为含药血清。空白对照组给予等量生理盐水灌胃,同样方法提取分离血清。②对于NG108-15细胞,当淀粉样蛋白25～35片段在培养液浓度为5μmol/L或淀粉样蛋白1-42的浓度为200nmol/L时较为合适。③NG108-15细胞以Dulbecco改良的Eagle培养基在37℃,体积分数为0.1的CO2培养箱中培养1d,然后加入浓度为5μmol/L淀粉样蛋白25-35或200nmol/L淀粉样蛋白1-42片段,继续培养1d后,即为老年性痴呆细胞模型。以含50g/L中药灌胃组血清或空白对照组血清的Dulbecco改良的Eagle培养基更换原培养液,仍加入上述浓度的淀粉样蛋白片段以维持老年性痴呆细胞模型,分化培养5d后进行各项指标观察,并设立无淀粉样蛋白片段对照。④利用免疫蛋白印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法观察补肾益智方含药血清处理NG108-15细胞老年性痴呆模型后的胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平及功能性突触形成率。主要观察指标:补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性、突触素蛋白水平、NG108-15细胞功能性突触形成、NG108-15细胞微小终板电位频率的影响。结果:实验纳入大鼠60只,全部进入结果分析。①补肾益智方含药血清对胆碱乙酰基转移酶活性的影响:在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42最终浓度200nmol/L时,中药灌胃组胆碱乙酰基转移酶活性均明显高于空白对照组[(1651.2±134.5),(1336.1±268.2);(1586.1±223.4),(1290.7±381.5)μmol/(g·h);P<0.05]。②补肾益智方含药血清对突触素蛋白水平的影响:中药灌胃组突触素Ⅰa和Ⅰb积分吸光度总值在无淀粉样蛋白、淀粉样蛋白25-35、淀粉样蛋白1-42时分别为5.02,1.36和2.46,空白对照组分别为3.18,0.57和0.71,中药灌胃组分别是空白对照组的1.6,2.4,3.5倍。③补肾益智方含药血清对NG108-15细胞功能性突触形成的影响:当无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组功能性突触形成水平均高于空白对照组[(90.6±6.0)%,(63.2±17.0)%;(58.0±13.1)%,(34.2±13.0)%;P<0.05]。④补肾益智方血清对NG108-15细胞微小终板电位频率的影响:无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白1-42时,中药灌胃组微小终板电位频率均高于空白对照组[(9.28±4.1),(5.48±5.14);(5.55±5.85),(3.05±4.46)个/min;P<0.01,P<0.05]。结论:补肾益智方剂含药血清在无淀粉样蛋白或淀粉样蛋白存在的情况下均能提高胆碱乙酰基转移酶的活性,不仅能保护由淀粉样蛋白引起的细胞突触素水平降低,在无淀粉样蛋白的情况下还可以提高突触素蛋白的表达,提高功能性突触的形成率和递质含量的释放。表明该方能拮抗老年性痴呆的病理发展,并通过提高神经递质的释放能力发挥对老年性痴呆的治疗作用。