摘要：目的研究葡萄膜黑色素瘤(UM)组织中肿瘤相关淋巴管生成与肿瘤组织病理学高危因素的关系。设计实验研究。研究对象北京同仁医院眼科病理室2009-2014年55例(55眼)UM眼球石蜡组织标本。方法采用淋巴管内皮特异性标记物LYVE-1和D2-40,通过免疫组织化学Elivision法检测UM组织中淋巴管生成情况,结合患者临床组织病理学资料进行统计学分析;统计肿瘤的微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMD),结合CD-34检测肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)的结果分析两者的相关性。主要指标UM组织的淋巴管阳性率、LMD、MVD。结果 55例UM组织标本中36例(65.5%)观察到淋巴管。肿瘤累及睫状体者淋巴管阳性率(95.0%)明显高于未累及者(48.6%),发生球外蔓延者淋巴管阳性率(93.3%)明显高于未发生者(55.0%),肿瘤最大基底直径>16 mm者淋巴管阳性率(82.4%)明显高于≤16 mm者(38.1%),上皮样细胞类型者淋巴管阳性率(88.0%)明显高于非上皮样细胞类型者(46.7%)(P均<0.05)。患者年龄(P=0.187)、性别(P=0.452)、眼别(P=0.663)、是否有虹膜新生血管(P=0.395)、是否继发视网膜脱离(P=0.641)、视盘是否受累(P=0.121)、是否浸润巩膜(P=0.284)及术前是否放疗(P=0.483)与UM组织中的淋巴管阳性率均无统计学相关。LMD与MVD成正相关(r=0.917,P<0.001)。结论 2/3的葡萄膜黑色素瘤中存在肿瘤相关淋巴管,其在UM的侵袭转移中可能起到一定的作用。免疫组织化学法检测淋巴管生成是判断UM患者预后的重要指标之一。

摘要：目的:探讨β-榄香烯防止胃癌淋巴转移的潜在机制。方法:人胃癌细胞株MKN-45体外培养,不同时间点检测其血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达。建立人胃癌原位移植模型,将裸鼠随机分为模型组,β-榄香烯低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg),按设计给药8周后处死动物,称取瘤重,检测微淋巴管密度(LMVD)、VEGF-C及血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)的表达。结果:VEGF-C在MKN-45细胞株中表达具有随培养时间延长而增高的趋势。与模型组比较,β-榄香烯中、高剂量可以降低裸鼠移植瘤组织中LMVD(P<0.05),下调肿瘤组织中VEGF-C(P<0.05,P<0.01),高剂量可下调VEGFR-3(P<0.05),VEGF-C及VEGFR-3 mRNA和蛋白表达一致。结论:VEGF-C及VEGFR-3是胃癌淋巴管生成的重要调控因子,β-榄香烯通过抑制VEGF-C及VEGFR-3的表达降低淋巴管密度(剂量依赖型)可能是其防止胃癌淋巴转移的机制之一。

摘要：目的构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP，探讨人类结肠癌BALB／c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP抑制血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达、结肠癌生长以及结肠癌淋巴管生成的效果。方法选择针对人类VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列，设计合成其相应的双链DNA，利用BamHI、HindⅢ双酶切插入pDC316-EGFP-U6载体后构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6，再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞，同源重组，酶切鉴定，包装扩增后得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6。裸鼠皮下注射LoVo细胞构建人类结肠癌皮下移植瘤模型24只，随机分为4组（每组6只）：以腺病毒、空病毒、裸siRNA以及PBS分别进行瘤内原位注射干预，计算肿瘤体积变化并绘制生长曲线，使用抗LYVE-1单抗和抗CD34单抗分别染色瘤内的血管和淋巴管，检测瘤内淋巴管和血管生成情况，计算微血管密度（MVD），微淋巴管密度（LVD）。结果腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组，腺病毒组与PBS对照组LVD分别为8．47±2．1，17．35±4．7（P〈0．05），腺病毒组与PBS对照组MVD分别为22．65±6．04，23．19±7．63（P〉0．05）。结论实验设计并合成的腺病毒载体介导的VEGF-C siRNA，在人类结肠癌裸鼠移植瘤模型中，瘤内注射腺病毒载体能显著抑制移植瘤的生长和肿瘤淋巴管生成，而对肿瘤血管生长无显著影响。

摘要：目的研究硫酸酯酶2(Heparan sulfate 2,Sulf2)在淋巴管生成中的作用。方法根据Sulf2 cDNA序列,设计并构建pCDH-Flag-Sulf2真核表达载体,慢病毒转染293FT细胞,获得合成纯化的rSulf2。通过流式分析、成管试验、裸鼠耳部淋巴管生成模型等实验,研究rSulf2对于淋巴管内皮细胞(Lymphatic endothelial cells,LECs)细胞周期、凋亡、成管能力和淋巴管生成的影响。结果构建的pCDH-Flag-Sulf2真核表达载体,经酶切和测序证明构建完全正确。Western blot检测证明293FT细胞转染pCDH-Flag-Sulf2真核表达载体后,rSulf2表达增高。合成纯化的rSulf2可以减少无血清培养液诱导的LECs细胞的凋亡,增加活细胞的比例,但对细胞周期无显著影响,rSulf2还可以增加淋巴管内皮细胞的体外成管能力及增加裸鼠耳部淋巴管的数量。结论 Sulf2可以抑制LECs细胞的凋亡,对淋巴管生成起到促进作用。

摘要：背景：骨髓干细胞具有高度增殖并分化为体内各种细胞的能力，移植后能够提供内皮细胞及细胞因子并促进毛细淋巴管生成。目的：评价自体骨髓干细胞移植治疗肢体淋巴水肿的临床疗效。设计、时间及地点：自身对照的前瞻性实验，于2004．10／2007—12在山东大学附属省立医院血管外科及科研中心完成。对象：淋巴水肿的患者27例，男7例，女20例，年龄21～53岁。方法：患者接受自体骨髓干细胞移植前采用肢体淋巴水肿的常规康复治疗。抽取患者自体骨髓后，用干细胞分离液处理并离心骨髓干细胞，制备干细胞悬液，对患者进行自体骨髓干细胞移植，将骨髓干细直接注射至患肢淋巴水肿区域处。主要观察指标：以患者治疗前和治疗后3个月健侧与患侧肢体特定截面周长的差值评价肢体淋巴水肿程度。结果：所有接受自体骨髓干细胞移植的患者，症状均有不同程度的改善，肢体肿胀明显消退，肢体沉重感减轻，瘢痕软化，上肢水肿患者术前健侧与患侧差值为（9．2±1．4）cm，治疗后3个月为（3．5±0．9）cm，下肢水肿患者术前健侧与患侧差值为（8．2±1．3）cm，治疗后3个月为（3．7±0．6）cm。结论：自体骨髓干细胞移植对肢体慢性淋巴水肿具有明显的治疗作用。

摘要：目的利用AdMax腺病毒系统构建人VEGF-C-siRNA腺病毒载体并在293细胞中扩增制备重组病毒。方法选择针对人VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,将其克隆入pDC316-EG-FP-U6载体中构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达。结果经限制性内切酶、PCR检测和GFP表达证实成功地构建了携带VEGF-C-siRNA的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论成功地构建了携带VEGF-C-siRNA片段的重组腺病毒载体,为进一步抗肿瘤淋巴管生成的研究奠定了基础。

摘要：新血管的形成(angiogenesis)是肿瘤生长转移和传播过程中的一种基本活动.因此,在癌症研究领域,人们对研究肿瘤血管生成的分子机制十分感兴趣.血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)路径是这一过程的关键调节者.VEGF/VEGFR轴由多重配基和受体质量叠加交错组成,并且受体与配基结合具有专一性,在不同的细胞中具有不同的细胞类型表达和功能.启动VEGFR信号通路,触发了一个网状的信号过程,从而促进血管内皮细胞生长、转移和存活.此外,VEGF介导的血管渗透性,已经被证实与恶性渗出有关.最近,VEGF的一个重要作用表现为可动员内皮祖细胞从骨髓向远处转移从而形成新生血管.VEGF促进肿瘤血管生成的作用和与人类癌症的发病机制的关系是确定的,因而有必要设计和发展针对这一途径的抑制因子.许多的抗VEGF/VEGFR治疗的研究表明,这些因子能有效地抑制临床前模型的血管生成和肿瘤生长.因此,抑制VEGF途径被确认为是一种重要的有效的抗癌模式.