摘要：目的:冷背药材作为宝贵的药材资源,但因其本身的特殊性和复杂性,导致其鉴别成为中药鉴定中的难题,因此亟需建立冷背药材的鉴别方法。该研究利用DNA特征序列(DSS)标记,建立一种冷背药材木槿皮基原植物木槿及其混伪品的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:基于叶绿体基因组序列分析获得木槿皮的候选DSS标记,使用DNA测序手段对DSS标记进行验证,基于得到的可靠DSS标记设计木槿皮基原植物特异性鉴别引物,对PCR反应条件进行优化,并进行耐受性和适用性的考察。结果:将扩增产物的测序结果与DSS比对后得到了1个可用于鉴定木槿的DSS标记,揭示了木槿正混伪品的区别特征,根据DSS标记设计出一对木槿正品特异性鉴别引物,使用该引物进行PCR扩增和凝胶电泳后木槿均出现约270 bp的单一明亮条带,而其4种混伪品均无此条带。结论:该研究得到的1个DSS标记可用于木槿的真伪鉴定,基于此DSS标记设计的特异性鉴别引物可准确、简便的鉴别木槿皮的基原植物及其混伪品,为木槿正伪品的分子鉴定提供了新的方法与思路。

摘要：目的通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定。对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察。结果COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750 bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r。在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574 bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带。结论设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法。

摘要：目的:蜈蚣是我国传统的中药材,具有良好的药用价值。目前市场上蜈蚣的混伪品日益增多,临床用药的安全性和有效性难以保证。该研究建立了一种蜈蚣基原物种的特异性聚合酶链式反应(PCR)方法,以准确、简便的鉴别蜈蚣及其常见混伪品。方法:通过比较蜈蚣及其混伪品基原物种的COI基因序列差异,根据变异位点设计蜈蚣正品少棘巨蜈蚣的特异性鉴别引物WG-500.F和WG-500.R,采集蜈蚣原动物样本及药材样本,优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。结果:少棘巨蜈蚣原动物样本及蜈蚣正品药材使用设计的蜈蚣鉴别引物经PCR扩增和凝胶电泳后出约500 bp的单一明亮条带,其他混伪品如多棘蜈蚣、模棘蜈蚣、哈氏蜈蚣、海南蜈蚣等均无条带出现。结论:PCR鉴别方法可准确鉴别蜈蚣原动物和药材的真伪,具有高度特异性,为中药材蜈蚣的真伪鉴别提供了良好的科学依据。该方法具有简单、直观等特点,有利于广泛的普及与应用,在中药材鉴定方面有着广阔的应用前景。

摘要：目的采用18 S rRNA基因、ITS2序列、SCAR标记等3种DNA分子标记法鉴别草珊瑚,为其分子鉴定提供依据。方法通过PCR扩增、克隆测序后获得草珊瑚18 S rRNA基因序列,并进行Blast比对;通过PCR扩增、测序并注释后获得草珊瑚ITS2序列,从GenBank上收集混伪品和其他植物的ITS2序列,使用MEGA5.5软件,计算种内种间遗传距离,构建系统聚类树;通过RAPD法获得草珊瑚SCAR分子标记,克隆测序后,设计特异性引物扩增草珊瑚及其混伪品。结果获得的草珊瑚18 S rRNA基因长度为1820 bp,Blast比对显示草珊瑚与金粟兰科同源性最高,同源性为99%,证明其为草珊瑚的18 S rRNA基因。获得的草珊瑚ITS2序列长度为500 bp,草珊瑚与其混伪品之间的遗传距离为0.190~0.219,混伪品之间的遗传距离为0~0.074,聚类分析显示草珊瑚聚为一支,混伪品聚为一支,与其他植物距离较远。获得草珊瑚的SCAR分子标记,用特异性引物扩增出现草珊瑚特异性产物,混伪品未出现特异性产物。结论3种分子标记法联合可更有效地鉴别草珊瑚及其混伪品,从而建立一套新的鉴别草珊瑚与混伪品的方法,为其鉴别提供新的思路。

摘要：目的：建立一种高效、准确的中药材海龙及其常见混伪品的特异性聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）鉴别方法。方法：通过比较海龙及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因（cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ）基因序列差异,根据变异位点设计刁海龙、尖海龙及拟海龙的特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上,将3对特异性引物组合,构建多重PCR体系。结果：在多重PCR体系中,刁海龙能扩增出485 bp片段,尖海龙可扩增出120 bp片段,拟海龙可以扩增出240 bp片段,其他混伪品均无条带。所设计的特异性鉴别引物具有高度的特异性。结论：该文所建立的位点特异性PCR鉴别方法可实现海龙的准确鉴别。

摘要：八角茴香是木兰科植物八角的果实,是生产食品调味香料及八角茴香油的重要原料。八角茴香的同属植物莽草和野八角的果实外观与八角极为相似,被误用或代替八角茴香的现象时有发生。传统的形态学和化学鉴别方法存在人为主观因素强、实验稳定性差等不足,无法高效、精确地鉴别八角茴香及其混伪品。因此研究从叶绿体trnL-trnF基因序列中发掘了八角茴香可区别于莽草和野八角的SNP位点,并通过引入错配碱基,设计了3条可区分八角茴香及其混伪品的特异性引物。在建立的多重PCR体系下,八角茴香扩增出304 bp的特异性条带,其混伪品则扩增出152 bp的特异性条带。该法可在同一个PCR反应中同时将八角茴香与其混伪品区分,鉴定结果简洁明确。文章开发的多重PCR体系为八角茴香的真实性鉴别提供了新的DNA分子鉴定技术,也为保障食材的质量安全和维护香辛料市场秩序提供了方法依据。

摘要：目的:开发一种能够准确鉴别山豆根药材的DNA分子标记方法,以保障山豆根临床用药的安全性和有效性。方法:在核糖体内转录间隔区挖掘山豆根及其混伪品的DNA多态性序列,分别设计山豆根及其混伪品的物种特异性引物,建立可用于区分山豆根及其5种混伪品的多重PCR体系。结果:该多重PCR体系不仅可以在一次反应中准确地实现山豆根及其5种混伪品的分子区别和鉴定,而且还可以检测山豆根中1%的掺伪品,DNA检测限低至0.1 ng。结论:与传统的性状鉴别、显微鉴别及理化鉴别方法相比,该研究所建立的山豆根DNA分子标记鉴定方法稳定性好、准确度高、特异性强,可以有效地解决市场上山豆根药材的植物来源复杂、混伪品难以鉴别的问题。

摘要：小茴香与孜然、莳萝子、葛缕子、蛇床子在外观形态上相似,存在掺假及混淆使用的现象。准确鉴别小茴香及其混伪品对维护小茴香产品质量和保护消费者利益具有重要意义。针对传统的形态学和理化鉴别方法的不足,文章通过比较小茴香及其混伪品的叶绿体全基因组,在accD基因中发掘了小茴香可区别于其他混伪品的单核苷酸多态性位点,并分别设计了小茴香及其混伪品的位点特异性引物。在建立的多重位点PCR体系下,小茴香产生了336 bp的特异性条带,其混伪品则产生了168 bp的特异性条带。方法同时验证了小茴香及其混伪品的2个SNP位点,可以在一个反应体系中同时将小茴香与其4种混伪品区分,鉴定结果准确可靠。因此,文章建立的多重PCR体系为小茴香鉴定提供了新的DNA分子标记方法,也为其他香辛料产品来源的鉴定提供了方法借鉴。

摘要：目的从分子水平鉴别冬虫夏草与其他品系虫草及其混淆品虫草。方法从冬虫夏草与其他品系虫草及其混淆品虫草中提取DNA;采用核糖体基因(rDNA)测序,设计18S基因特异性引物进行扩增,扩增产物经纯化后,直接测序法进行测序。结果测序得到各样品18S序列,冬虫夏草与西藏白草、西藏黑草、无头草、默勒草的18S序列相似度为100%;与亚香棒的18S序列相似度为91.37%;与北虫草的18S序列相似度为91.74%。结论 18S序列可有效地鉴别冬虫夏草及其混淆品北虫草和亚香棒虫草。

摘要：目的:建立一种快速、高效、简便的鹿茸、鹿角位点特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:通过比较梅花鹿、马鹿及其混伪品的COI,Cytb基因序列差异,根据Cytb片段上的3个SNP (single nucleotide polymorphism)变异位点设计出一对鹿茸的特异性鉴别引物LR-238上游和LR-238下游,并对影响PCR结果的主要因素退火温度,PCR循环次数,模板DNA浓度,Taq酶用量和及影响重复性的Taq酶种类和PCR仪型号等进行方法学考察和优化。结果:进行方法学考察确定最优鉴别条件的基础上,当PCR退火温度为56℃,循环次数为35次的条件下,鹿茸、鹿角正品均能扩增出约250 bp片段,其他9种混伪品麋鹿、白唇鹿、水鹿、坡鹿、黇鹿、骡鹿、驯鹿、驼鹿、狍及阴性对照无条带。不同来源的药用的马鹿亚种东北马鹿、塔河马鹿、天山马鹿、阿拉善马鹿、阿勒泰马鹿、新西兰马鹿,梅花鹿亚种东北梅花鹿、华南梅花鹿样品使用建立的位点特异性PCR鉴别方法均产生约250 bp特异性鉴别条带。结论:该文设计的鉴别引物具有高度的专属性,所建立的位点特异性PCR鉴别方法可用于鹿茸、鹿角的准确鉴别。