摘要：目的:近年来,中药材地龙的商品价格不断上涨,市场的混伪品随之增加。其主要鉴别特征在药材中大部分丢失,难以区分。因此,急需建立一种准确、稳定的中药材地龙基原鉴别方法。方法:根据地龙及其混伪品的COI基因序列差异找到变异位点,从而设计参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,优化反应体系并进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上将特异性引物组合,构建多重聚合酶链式反应(PCR)体系,从而建立了一种高效准确、操作简便、专属性强、重复性好的中药材地龙及其常见混伪品的多重位点PCR鉴别方法。结果:在该方法下广地龙基原参环毛蚓可得到366 bp片段,沪地龙基原通俗环毛蚓和威廉环毛蚓可得到487 bp片段,栉盲环毛蚓可得到475 bp片段,其他混伪品均无条带。将之组合形成的多重PCR可在一次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别沪地龙和广地龙。结论:该文所建立的多重位点特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中药材地龙真伪。

摘要：目的探讨多重实时荧光PCR检测方法对川贝母及伪品鉴别的可行性。方法通过对常见贝母属植物的ITS、psb Atrn H、rbc L和matK基因序列种间变异、遗传距离及系统发育关系分析,选择进化速率快、种间变异大、种内变异小的基因作为靶基因,设计川贝母及伪品贝母的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度及混合样本检测与测序方法比较进行方法评估。结果贝母属ITS和psb A-trn H变异位点高于rbc L和mat K,通过遗传距离分析rbc L和mat K基因显著低于ITS和psb A-trn H基因,以ITS作为靶基因,建立多重实时荧光PCR检测方法特异性强,灵敏度达0.01ng,对18份样本抽查检出4份伪品贝母,检测结果与构建的NJ树聚类分析结果完全一致。结论基于ITS区域序列为靶基因建立多重实时荧光PCR检测方法能够成功鉴定川贝母及其混伪品,为川贝母真伪鉴别提供依据。

摘要：目的：建立山茱萸的SCAR标记,为山茱萸药材分子鉴定提供科学依据。方法：用随机引物进行RAPD筛选,获取特异的RAPD标记条带,分离提取RAPD标记条带,进行克隆和测序,根据测定RAPD标记条带的两端序列设计1对特异引物进行常规PCR反应,获得SCAR标记。结果：根据RAPD标记条带的序列设计筛选了4对特异引物,其中YST38,YST43分别对7个山茱萸品种样本的DNA进行SCAR扩增,7个山茱萸栽培品种均能产生单一的PCR条带,可以用作山茱萸的鉴别;而YST38对圆柱形果型、长梨形果型还有1条特异性条带,可以做为这2个品种的鉴别依据;YST39对7个山茱萸品种进行扩增,纺锤形果型样本的谱带大小（350400 bp）比其余6个果型的谱带大小（650700 bp）短了300 bp左右,这条谱带可以做为纺锤形果型的鉴别依据;YST92对圆柱形果型、长梨形果型均产生了1条600700 bp的条带,椭圆形果型、短圆柱形果型产生了1条200300 bp的条带,长圆柱形果型、纺锤形果型、短梨形果型3个果型无扩增,YST92可用来筛选山茱萸的几种果型。结论：建立的SCAR标记,条带清晰明亮,结果稳定,可作为山茱萸品种选育和药材分子鉴定的依据。

摘要：目的:以水牛角鉴别为例建立中药重组酶介导扩增(Recombination-aid amplification,RAA)快速鉴别方法,用于水牛角及其混伪品牦牛角的鉴别。方法:通过比较水牛角及其混伪品牦牛角基原物种的线粒体基因组序列差异,寻找高变异区域,根据变异位点设计水牛角正品水牛的特异性RAA鉴别引物SNJ-1.F和SNJ-1.R及荧光探针***,使用碱裂解法提取DNA,优化RAA反应体系,在37℃下恒温孵育15~20 min,通过凝胶电泳及实时荧光监测反应结果,使用DNA测序方法验证RAA鉴别结果的准确性。结果:在37℃恒温孵育20 min后,水牛角RAA产物凝胶电泳图谱出现约140 bp特异性鉴别条带,使用实时荧光RAA鉴别时,水牛角正品均在6.21~8.37 min出现特异性扩增,牦牛角样品均在10.08 min后才出现扩增,COI片段DNA测序鉴别结果与荧光RAA鉴别结果相吻合。结论:特异性RAA技术可在20 min内快速鉴别水牛角,可用于水牛角药材、饮片及其制品的快速现场鉴定。该方法具有简单、快速、无需大型仪器等特点,在中药现场鉴定、药检抽查等方面有着广阔的应用前景。

摘要：目的:建立一种霍山石斛特异性的分子鉴别方法。方法:采用RAD测序技术对霍山石斛及其近伪品进行测序分析,根据差异片段设计聚合酶链反应-限制性内切酶酶切长度多态性(PCR-RFLP)引物,使用限制性内切酶进行酶切鉴别。结果:霍山石斛鉴别引物可扩增霍山石斛及其近伪品序列,扩增产物为153bp大小的条带,而限制性内切酶Alu I可以识别霍山石斛及其伪品的差异序列,仅近伪品石斛的序列可被酶切形成两个片段,而霍山石斛的序列不能被切开,从而特异性鉴别是否为霍山石斛。结论:本实验建立的PCR-RFLP方法可以鉴别霍山石斛的真伪。

摘要：哈蟆油为我国珍稀名贵中药材,存在混伪品多、基原有争议、系统分类历史复杂、鉴定困难等难题.本研究首先通过本草考证和现代研究资料整理,结合基于线粒体全基因组的分子系统发育关系分析,以及哈蟆油传统产区与原动物地理分布叠加比较,证实中国林蛙、东北林蛙和黑龙江林蛙均为有效种,中国林蛙仅限于华北和华东分布,拉丁名应为“*** David,1875”,《中国药典》采用“Rana temporariachensinensis David”为中国林蛙拉丁名不妥,哈蟆油的基原应为东北林蛙*** Günther,1876.然后设计新的PCR引物以解决蛤蟆油COI序列的非特异性扩增难题,建立包含哈蟆油及其混伪品的DNA条形码物种鉴定数据库.最后,基于市售药材验证所建立的哈蟆油DNA条形码物种鉴定方法,发现市场中存在青蛙油、牛蛙油等混伪品,DNA条形码技术可将哈蟆油及其混伪品准确鉴定到物种水平.本研究将为保障哈蟆油的临床用药安全和消费者的合法权益提供技术支持.

摘要：对动物线粒体基因COⅠ进行PCR扩增及双向测序,得到羌活鱼及其混伪品无斑肥源和截趾虎的COⅠ基因序列。通过序列分析比对,根据序列差异设计特异性引物SJYW1,SJYW2,改变退火温度及循环数以得到特异性的反应条件。结果表明,当复性温度为54℃,25个循环时,正品羌活鱼在约350 bp处有明显扩增带,而无斑肥源和截趾虎没有扩增带。该实验具有较高的特异性、重复性,可用于羌活鱼的鉴别。

摘要：目的:建立蚂蟥特异性PCR鉴别方法,能够快速准确地鉴别蚂蟥与其常见伪品。方法:通过分析蚂蟥与其常见伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列,寻找蚂蟥SNP变异位点,设计特异性引物;通过对退火温度、循环次数、DNA模板量及Taq酶等关键因素的考察,确立最优反应体系及条件,并将特异性PCR方法应用到水蛭(蚂蟥)粉末中进行药材粉末的基原鉴别,同时为保证试验结果的准确性,将PCR扩增产物进行一代测序。结果:特异性PCR结果表明蚂蟥在400~600 bp有单一明亮条带,常见混伪品则无此条带,试验结果与一代测序结果一致,为蚂蟥。结论:该方法能够将蚂蟥与其常见伪品菲牛蛭、东北小水蛭、黑条、小黑条等区别,且能鉴别水蛭(蚂蟥)粉的基原,为提升中药监管力度,打击中药掺伪行为提供了强有力的技术支持。

摘要：目的:建立中药材麦冬的PCR检测方法。方法:对麦冬及其混伪品的ITS序列进行比对分析,在ITS1区设计了麦冬的特异性引物,并通过对PCR反应条件的优化,建立麦冬的PCR鉴别方法。结果:建立了麦冬真伪鉴别的PCR检测方法,并利用该方法对收集的样品进行检测,实现了麦冬与混伪品的准确鉴别。结论:该方法操作简单、特异性强、重复性好,检测结果客观易判读。

摘要：在现有单一物种检测方法的基础上,以ITS2基因作为靶基因片段,设计酸枣仁及伪品理枣仁的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度、覆盖度及混合样本检测与传统性状鉴别比较进行方法评估。该方法通过1管PCR反应实现对酸枣仁和伪品理枣仁的同时鉴别,反应时间缩短至2~3 h,方法的特异性好,灵敏度可达到5 pg/反应。基于ITS2区域序列为靶基因建立双重实时荧光PCR检测方法能够成功鉴定酸枣仁及其混伪品理枣仁,为酸枣仁真伪鉴别提供依据。