摘要：目的研究子痫前期(PE)相关miR-210通过调控钾离子通道调控因子1(KCMF1)影响滋养细胞侵袭功能的机制。方法选取24例PE患者及25例同期健康产妇,实时荧光定量PCR检测其血清、胎盘组织miR-210相对表达量。采用脂质体转染法将miR-210抑制物(miR-210 inhibitor)及阴性对照、miR-210模拟物(miR-210 mimimc)及阴性对照转染至HTR8/Svneo细胞并设置空白对照组。转染48 h后,采用荧光显微镜观察转染效率;Transwell^(TM)小室实验测定各组细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测HTR8/Svneo细胞miR-210、KCMF1 mRNA水平、Western blot法检测KCMF1蛋白相对表达量;双荧光素酶实验检验miR-210与KCMF1的靶向关系。结果PE组血清及胎盘组织miR-210相对表达量均高于对照组。转染后48 h,各组细胞转染效率均>80%;与其他组比较,miR-210 mimics组穿膜细胞数减少,miR-210相对表达量增加,KCMF1 mRNA及蛋白相对表达量降低,相对荧光素酶活性降低;miR-210 inhibitor组miR-210相对表达量降低。结论PE血清及胎盘中miR-210异常高表达,上调miR-210引起KCMF1表达下调,抑制滋养细胞侵袭。

摘要：目的:以人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3细胞为研究对象,结合该细胞侵袭和迁移能力的变化情况,研究转染miR-155 mimics和miR-155 inhibitor之后CXCR4的表达变化及其对下游PI3K/AKT信号通路的影响作用,从而探讨miR-155参与子痫前期发生发展的分子机制。方法:设计miR-155 mimics和miR-155 inhibitor,对JEG-3进行转染,通过Transwell侵袭实验、划痕实验,观察转染后细胞的侵袭和迁移能力的变化;利用Real-time PCR检测CXCR4 mRNA的表达;利用Western blot检测CXCR4及下游p-AKT蛋白的表达水平。结果:Real-time PCR结果显示,miR-155 mimics转染组CXCR4 mRNA相对表达量(0.589±0.096)明显低于空白对照组(1.503±0.090)和阴性对照组(1.146±0.153),差异有统计学意义(P<0.05);miR-155 inhibitor转染组CXCR4 mRNA相对表达量(1.739±0.083)与两组对照组相比差异也有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示miR-155 mimics转染组CXCR4蛋白和下游p-AKT蛋白表达水平均明显降低,而miR-155 inhibitor转染组CXCR4和p-AKT蛋白水平则升高,与空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,与空白对照组(63.46±2.37)和阴性对照组(49.29±5.81)侵袭细胞数相比,miR-155 mimics转染组侵袭细胞数(22.89±9.42)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);同时,miR-155 inhibitor转染组侵袭细胞数(81.50±11.25)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果显示,转染miR-155 mimics后,JEG-3细胞相对迁移距离(0.159±0.058)低于空白对照组(1.080±0.045)和阴性对照组(0.823±0.201),差异有统计学意义(P<0.05);而miR-155 inhibitor转染组,JEG-3细胞相对迁移距离(1.640±0.078)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-155可能通过抑制CXCR4的表达进而抑制其下游PI3K/AKT信号通路的活化,从而影响滋养细胞的侵袭及迁移能力,最终导致子痫前期的发生发展。

摘要：目的探讨米非司酮、米索前列醇对滋养细胞TRIM22表达的影响。方法临床病例分组如下:将40例早期妊娠患者分为胚胎停育组(A组)12例,人工流产组(B组)14例,药物流产组(C组)14例;体外培养滋养细胞HTR-8,按2×2析因设计随机分为如下4组:空白对照组(D组)、米索前列醇组(E组)、米非司酮组(F组)、米非司酮+米索前列醇组(G组)。采用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力。细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力。免疫组化检测TRIM22蛋白表达部位及表达强度。实时荧光定量PCR和Western blottiing检测TRIM22 mRNA及蛋白表达水平并进行半定量分析。结果临床病例中,TRIM22主要表达在滋养细胞的细胞核;A、C两组的TRIM22蛋白和mRNA表达强度低于B组,差异有统计学意义(P0.05)。滋养细胞体外模型中,使用米非司酮组(F、G组)与未使用米非司酮组(D、E组)间比较,滋养细胞增殖能力和迁移能力降低,TRIM22 mRNA和蛋白表达强度降低(P0.05);米非司酮与米索前列醇间无明显交互作用(P>0.05)。结论米非司酮可能通过下调TRIM22的表达抑制了滋养细胞的增殖、迁移,米索前列醇对其作用无统计学意义影响。

摘要：目的:探讨微小核糖核酸(miR)-146a-5p与子痫前期的关系及作用机制。方法:对体外培养绒毛膜癌细胞JEG-3,经脂多糖(LPS)诱导后,与空白对照组相比,检测在LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p和TRAF6的表达。设计分组分为control组、LPS组、miR-146a-5p mimic组、miR-146a-5p inhibitor组。通过QPCR定量检测各组JEG-3细胞中miR-146a-5p以及白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-a(TNF-α)的mRNA水平;利用Western Blot检测JEG-3细胞内TRAF6/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:(1)miR-146a-5p mimic组的miR-146a-5p表达明显高于其余3组,差异有统计学意义(P0.05)。(4)Western Blot结果显示加入miR-146a mimic后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达较对照组明显下降;加入miR-146a inhibitor后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达则明显升高。结论:miR-146-5p可能通过抑制TRAF6/NF-κB信号通路影响子痫前期母胎界面的炎症反应。

摘要：目的构建长链非编码RNA-GAS5(lncRNA-GAS5)过表达及干扰慢病毒载体,并在人滋养细胞中进行转染效率鉴定。方法获取lncRNA-GAS5基因序列,合成重组lncRNA-GAS5全基因序列,同时设计并合成3条lncRNA-GAS5 RNAi序列,构建过表达及干扰慢病毒载体,转染至293T细胞包装病毒并测定其滴度,转染人滋养细胞株HTR-8/SVneo后,使用荧光显微镜观察荧光表达情况,采用实时定量聚合酶链式反应法检测lncRNA-GAS5表达,并筛选出最佳干扰效率的表达载体。结果过表达载体感染细胞后,其表达量提高了2.12倍;干扰载体感染细胞后,其表达量降低了67.3%。结论本实验成功构建了lncRNA-GAS5慢病毒过表达和干扰载体,可为后续进一步研究提供基础。

摘要：目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用.

摘要：Objective: Given the great variability of human chorionic gonadotropin (HCG) levels after a single dose of methotrexate (MTX) for ectopic pregnancy, it remains complicated to identify cases undergoing persistence until a week from treatment. We evaluated whether pretreatment patterns of HCG levels could be useful for an earlier detection of persistent trophoblast. Study design: A retrospective study on 62 patients treated by a systemic single dose of methotrexate (50 mg/m2) for an ectopic pregnancy. Samples for HCG detection were obtained on days -2 and 0 before the therapy, on days +3, +7 and then weekly until values were undetectable. Patients were divided into three groups: Group U (up, meaning "increasing") and Group D (down, meaning "decreasing") when HCG levels on day 0 were respectively higher or lower than day -2 level of more than 20%and Group P (plateau) when the difference between day-2 HCG level and the level on day 0 was less than 20%. Results: All the patients of Group D underwent a complete resolution, with a percentage of 33.3%of cases who underwent an initial rise of HCG levels on day +3. The percentage of cases undergoing an initial rise of HCG levels in Group U patients was significantly higher than in Group P patients (60.0%versus 28.6%), but the resolution rate resulted similar in the two groups. For patients of Group P, an increase of HCG levels on day +3 was significantly correlated to the failure of the therapy. Indeed, comparing the cases with an immediate increase of HCG levels to the cases with immediate decrease of HCG levels on day +3, the persistence rate was 80%for the former and 12%for the latter (P< 0.0001). Conclusion: An initial rise of HCG levels after the therapy does not seem to have a clinical relevance in Group D and Group U patients, it well correlates to trophoblastic persistence in Group P patients.