摘要：目的建立检测烟曲霉菌和黑曲霉菌的双重荧光定量聚合酶链反应方法,探讨其临床应用价值,为快速准确地鉴定侵袭性曲霉菌寻求新的检测技术。方法设计可扩增烟曲霉菌和黑曲霉菌18sRNA引物和探针,建立双重荧光定量聚合酶链反应体系并进行方法学评价;选取45例临床确诊的侵袭性真菌感染(IF)患者和20例阴性健康对照者的全血,应用本方法对以上两种真菌进行DNA检测;结果与常规鉴定方法比较,评估该方法的敏感性和特异性。结果对于纯化后的烟曲霉菌和黑曲霉菌DNA,该方法的敏感性为1拷贝,特异性达到100%,批内和批间试验均显示了较好的重复性;临床标本检测结果显示,该方法与常规方法比较,敏感性和特异性均为100%。结论应用双重荧光定量聚合酶链反应方法同时检测烟曲霉菌和黑曲霉菌具有良好的敏感性、特异性和重复性,与常规鉴定方法结果相符,有利于烟曲霉菌和黑曲霉菌感染的早期快速诊断和实现对进展期感染者的动态监测。

摘要：目的探讨大鼠角膜真菌感染后角膜局部细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达及其与局部炎症反应的关系。设计实验研究。研究对象烟曲霉菌感染后的大鼠角膜。方法各组大鼠左眼为实验眼,右眼为对照眼。在建模后早期（1~3天）、中期（4~7天）、晚期（10~14天）三个不同阶段取下角膜组织,采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测ICAM-1在不同病程角膜组织中的表达。应用免疫组化及HE染色的方法,观察不同病程角膜组织中中性粒细胞、总T淋巴细胞的动态变化。主要指标ICAM-1及中性粒细胞、总T淋巴细胞。结果 ICAM-1早期开始表达（0.58±0.21）,中期达高峰（1.22±0.12）,至晚期时仍有少量表达（0.94±0.07）。这一变化趋势与角膜局部中性粒细胞的变化一致。总T淋巴细胞在病程中逐渐增多,病程后期达高峰。ICAM-1的表达在实验对照组与实验组早、中、晚期组四组间差异均有统计学意义（P均=0.000）。结论 ICAM-1参与了角膜烟曲霉菌性感染后角膜局部的炎症反应。

摘要：目的通过建立重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)直接检测标准烟曲霉菌株的方法,探讨其无需样本前处理的可行性。方法针对标准烟曲霉核酸序列保守区域设计RPA扩增引物,使用100、10^(-1)、10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)麦氏浊度的标准烟曲霉菌液作为无样本前处理组进行直接RPA扩增;同时,分别采用柱式法、磁珠法、氯化苄法提取烟曲霉菌DNA作为样本前处理对照组并进行RPA扩增,最后,应用2%琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析。结果标准烟曲霉菌的100、10^(-1)、10^(-2)及10^(-3)麦氏浊度均可于39℃30min内扩增出目的条带;三种提取方法结果分别为:柱氏法(13.8±0.83)ng/μl,磁珠法(11.5±2.25)ng/μl,氯化苄法(64.9±1.31)ng/μl,三种方法均能扩增出目的条带,其中氯化苄法产出率较高(64.9±1.31)ng/μl。结论 RPA可以扩增出未经前处理(核酸提取)的样本,具有快速简便的优点,为检测烟曲霉菌提供了一个有效的工具。

摘要：为建立鸡烟曲霉菌快速检测方法,根据GenBank已发表的benAfum基因序列设计1对特异性引物,建立了检测烟曲霉菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并用该方法对烟曲霉菌分离株进行了检测。结果显示,该方法灵敏度高,对烟曲霉菌最低检出量为10 copies/L;重复性好,变异系数在0.7%~0.8%之间;特异性强,与黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、塔宾曲霉及白色念珠菌等病原菌无交叉反应;该方法操作简单、耗时短,只需2 h即可完成整个试验过程。上述结果表明,该方法可应用于烟曲霉菌感染的快速检测。

摘要：目的 构建自身启动子调控、含有红色荧光蛋白（RFP）标记的钙调蛋白烟曲霉菌株，观察菌株生长过程中钙调蛋白的动态分布。方法 设计烟曲霉钙调蛋白基因的两端侧翼序列，对两序列及含有RFP-烟曲霉pyrG 营养标记（mRFP-AfpyrG）的质粒分别进行PCR扩增，再通过融合PCR对上述3个片段进行整合，形成转化用的线性片段。随后采用原生质体转化法将上述片段转入烟曲霉受体菌株中，构建钙调蛋白-RFP烟曲霉菌株。在营养筛选培养基平板上挑取单克隆菌落培养，选取荧光表型最稳定的单菌菌落对其转化子进行PCR验证。将重组菌株和野生菌株分别接种于固体营养培养基中，培养不同时间后荧光显微镜下观察菌株形态学差异。将上述两株菌分别接种于液体培养基中，甲基四氮盐（XTT）方法观察其生长活力差异，并对红色荧光标记菌株进行动态活体观察，分析钙调蛋白在烟曲霉生长发育过程中的时空分布。结果 重组菌株的荧光表型及转化子的PCR鉴定结果表明，钙调蛋白-RFP烟曲霉菌株构建成功。重组菌株与野生菌株在24 h时生长活力（A490值）分别为0.689 ± 0.081和0.678 ± 0.054（t = 1.32，P〉0.05），差异无统计学意义，且形态学方面也无显著差异。钙调蛋白在烟曲霉生长过程中始终处于极性生长过程中的菌丝顶端、分枝出芽点及新形成的分枝顶端。结论 钙调蛋白可能参与调控烟曲霉孢子萌发及菌丝极性生长等重要生物学过程。

摘要：目的：建立一种针对烟曲霉菌进行检测的实时PCR方法。方法以烟曲霉菌线粒体基因组内特有序列为靶位，设计引物，建立实时PCR反应体系，并初步验证其检测性能。结果所建立的PCR法具有较好的敏感度、稳定性和特异度，检测线性范围为10^2～10^8 copies/mL。结论所建立的烟曲霉实时PCR法具有较好的敏感度、稳定性和特异度，检测性能良好，具体临床应用价值需要经多中心实验进一步验证。

摘要：目的建立一种针对烟曲霉的探针实时聚合酶链反应(PCR)法并初步探讨其临床应用价值。方法以烟曲霉基因组内特有序列为靶位,设计引物、探针,建立PCR反应体系,初步应用于临床痰标本和血浆标本的检测验证其检测性能。结果所建针对烟曲霉的实时PCR法具有良好的灵敏度和特异度,将其应用于临床痰标本和血浆标本的检测效果较好。结论所建立的荧光探针实时PCR法初步应用于临床痰标本和血浆标本检测,效果良好,其实际临床应用价值仍需进行大样本验证。

摘要：防霉菌繁殖墙纸日本五洋建设公司与千叶工业大学小峰裕已副教授共同开发了霉菌难以繁殖的墙纸，在墙纸原料聚氯乙烯树脂中加入有机系防霉剂，即使墙纸上有菌，也无法使其繁殖。五洋建设公司先在本公司设计、施工的设施中采用这纸，将来也考虑对外出售。这种墙纸是在原料阶...