摘要：目的预测与鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+细胞毒性T细胞(CTL)抗原表位。方法以国人常见的HLA-A*0201位点为靶点,依据生物信息学软件扫描烟曲霉特异性抗原Asp f16的全部427个氨基酸序列。使用HLA-A*0201转基因小鼠制备骨髓来源的树突状细胞(DC)和CTL。流式细胞仪技术检测DC表面MHC II类抗原,CD80,CD86和CD11c的表达来验证其是否成熟。ELISPOT试验检测烟曲霉抗原多肽特异性CTL产生的细胞因子IFN-γ。四聚体(Tetramer)试验证实烟曲霉特异性CTL与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的亲和性。结果根据与MHC I类分子结合的半衰期评分,选择了3个HLA-A*0201限制性抗原表位。流式细胞仪分析示成熟DC高表达HLA II类抗原,CD80,CD86和CD11c。Tetramer试验证实烟曲霉特异性T细胞受体与抗原肽,HLA-A*0201分子复合体的高亲和性。ELISPOT实验结果表明烟曲霉抗原肽体外可以活化CD8+CTL,被负载了抗原肽的DC刺激活化后可以产生IFN-γ。结论本研究成功鉴定烟曲霉抗原Asp f16的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,可作为疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型抗烟曲霉疫苗提供参考。

摘要：目的:探讨分析依赖热稳定解旋酶DNA恒温扩增技术检测烟曲霉;方法:将烟曲霉基因作为目的片段,以此设计特异度引物,并且在恒温条件下建立快速检测烟曲霉依赖热稳定解旋酶DNA恒温扩增技术,进行特异度和灵敏度实验,并与普通聚合酶链式反应(PCR)方法进行比较。结果:热稳定的依赖解旋酶恒温核酸扩增(tHDA)产物序列与Ensembl Fungi数据库的序列相似率高达95%;在特异度检测中,黄曲霉的电泳结果为阳性,在100 bp处能够观察到清晰的条带;在灵敏度检测中,不同稀释浓度均能够明显观察到条带;结论:烟曲霉的tHDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求低,普通水浴槽即可进行反应。

摘要：目的通过两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株。方法通过在ssk1基因上下游的侧翼序列设计引物时引入15 bp的融合片段的互补的同源区,使用两步融合PCR的方法将长度约为4.3 kb的目的片段融合扩增,并直接使用PCR产物通过传统的原生质体法进行烟曲霉的转化,得到转化子运用PCR和Southern blot进行相应的验证。结果通过融合PCR法较快的得到大约4.3 kb的融合的目的基因片段,运用原生质体法成功进行了烟曲霉的转化,得到5个转化子。经过PCR和Southern blot经验证有4株是正确的转化子。结论在合适的引物设计及适当的融合PCR反应条件下,两步融合PCR法是一种简单高效的构建烟曲霉基因敲除株的方法,值得推广。

摘要：烟曲霉是曲霉属中最常见的致病菌.它的rRNA基因ITS间区序列尚不完全清楚.我们应用分子克隆技术率先对烟曲霉的ITSⅠ区和ITSⅡ区进行了克隆测序分析.结果发现,3株不同来原的烟曲霉的ITSⅠ区序列完全相同,而1株烟曲霉的ITSⅡ区序列与基因库中的1株烟曲霉的相应序列仅有2个碱基的变异.从而揭示烟曲霉的两个ITS区序列都十分保守.我们将所测得的烟曲霉rRNA基因ITSⅠ区和Ⅱ区序列与基因库中所查寻到的黄曲霉、黑曲霉、土曲霉及构巢曲霉等的相应序列相比,均有一定的变异,而且种间变异大于种内变异.该结果不仅为烟曲霉与其他曲霉亲缘关系的分析准备了原始资料,而且为烟曲霉特异性引物或探针的设计进而为曲霉感染的诊断提供了依据.

摘要：目的分离克隆烟曲霉组氨酸激酶基因,进一步探讨其在侵袭性感染中的作用。方法基于组氨酸激酶保守区设计简并引物,通过逆转录-聚合酶链反应获得特异性扩增产物,对目的产物克隆、测序。通过Blast分析进行相似性比较。以获得的目的基因片段作为探针,通过Northern杂交比较该基因在体外与体内感染时表达的差异。结果逆转录-聚合酶链反应获得2个片段,长度分别为171bp、305bp,其中305bp片段与构巢曲霉tesA基因的同源性>80%。该基因在小鼠侵袭性肺曲霉病中表达水平明显增加。结论烟曲霉组氨酸激酶基因的表达可能有助于其在体内存活,该基因可能是烟曲霉潜在的毒力基因。

摘要：采用响应面分析对影响烟曲霉K1(Aspergillus fumigatus K1)生产壳聚糖酶的发酵培养基进行优化。首先采用部分因素试验筛选出影响壳聚糖酶产量的显著因素:牛肉膏和CaCl2。利用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域。最后,应用中心组合设计和响应面分析确定烟曲霉K1产壳聚糖酶的最佳培养基组成(%,W/V)为:壳聚糖1.5、牛肉膏2.1、KH2PO40.1、MgSO4·7H2O0.1、CaCl20.4和Tween0.1。经过优化,壳聚糖酶产量可达44.24U/ml,比开始条件提高2.4倍以上。

摘要：以碳酸钠预处理的稻草为唯一碳源,硫酸铵为氮源,采用烟曲霉(Aspergillus fumigatus)对稻草进行酶解,嗜鞣管囊酵母(Saccharomyces tannophilus)对酶解产物进行发酵生产乙醇,并对酶解及乙醇生产工艺进行研究。结果表明,烟曲霉及嗜鞣管囊酵母发酵碳酸钠预处理稻草生产乙醇的工艺为10 g稻草经90 mL 0.15 mol/L碳酸钠预处理后,调节pH值为4.5,按4%(V/V)的接种量接入烟曲霉种子液,于37℃、150 r/min条件下酶解12 h后,按2%(V/V)的接种量接入嗜鞣管囊酵母种子液,于37℃、150 r/min条件下发酵16 h,生物乙醇产量达到最高为(26.30±0.86)g/L。

摘要：α-转移葡萄糖苷酶是工业上生产IMO的必需酶制剂之一,但因成本过高而难以实现工业化生产。在中国科学院'十二五'基础前沿专项'微生物制造关键技术的开发与应用一黑曲霉高效蛋白质表达系统的设计与构建'和青岛蔚蓝生物集团有限公司的赞助下。