摘要：目的探究lncRNA TP53TG1在健康和炎症牙髓中的表达差异,以及对脂多糖(LPS)诱导后人牙髓干细胞(hDPSCs)炎症因子转录水平的影响。方法设计合成lncRNA探针,利用RNA荧光原位杂交技术检测健康和炎症牙髓组织中lncRNA TP53TG1的表达情况。通过酶解组织块法分离培养hDPSCs,对培养的hDPSCs进行多向分化诱导验证,并通过流式细胞术鉴定表型特征。将hDPSCs分为si-NC组、si-NC+LPS组、si-TP53TG1+LPS组,分别转染对照序列和TP53TG1的siRNA,再用LPS处理si-NC+LPS组和si-TP53TG1+LPS组24 h,通过qRT-PCR检测各组炎症因子IL-1β、IL-8以及TNF-α的mRNA表达水平。结果在健康牙髓组织中可观察到lncRNA TP53TG1的表达,主要分布在成牙本质细胞中。炎症状态下,lncRNA TP53TG1的表达量上升,全牙髓可见分布。LPS处理后,hDPSC的TNF-α、IL-1β以及IL-8的mRNA表达水平上升,下调lncRNA TP53TG1导致hDPSCs的TNF-αmRNA表达水平进一步升高。结论lncRNA TP53TG1可能参与调控牙髓炎症过程和成牙本质细胞的免疫调控作用。

摘要：目的:构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferators activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α)短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)分化的影响。方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰PGC-1α编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PLKO.1/PGC-1α-shRNA感染DSPC,实时荧光定量PCR检测PGC-1α的表达,细胞化学染色和实时荧光定量PCR检测其对DPSC分化的影响。结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,DPSC转染了PGC-1α-shRNA后PGC-1α表达水平降低,干扰效率达81%,而且细胞钙化结节增多,牙本质涎磷蛋白和Ⅰ型胶原的表达明显上调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:慢病毒介导的PGC-1α-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响牙髓干细胞的分化。

摘要：目的:利用同轴静电液滴技术设计并制备一种用于牙髓干细胞(DPSCs)三维细胞球体构建、培养的核壳微囊。方法:获取临床收集DPSCs并通过流式细胞仪进行细胞鉴定;构建核壳微囊,调节内外相溶液浓度、流速和细胞密度等参数,对比微囊形貌及尺寸筛选最佳制备条件;活/死染色和CCK-8实验检测微囊内的细胞球的细胞活性,免疫荧光染色观察细胞骨架。结果:成功分离培养DPSCs,构建以海藻酸钠(Alg)为壳层和羧甲基纤维素(CMC)为核层的载细胞微囊。当细胞密度为1×108个/mL时,微囊内的DPSCs在24 h内能自发形成直径为(101.93±10.11)μm的单一球体。活/死染色显示培养7 d内细胞存活率未明显降低(P>0.05),CCK-8显示培养4 d时细胞增殖率增加至(114.91±7.70)%(P<0.05),7 d时增长至(169.05±5.29)%(P<0.001)。细胞在微囊内形成致密结构。结论:该方法制备的核壳微囊可以促进DPSCs形成三维细胞球并长期存活。

摘要：背景:随着自组装肽的研究越来越深入,因其无毒性和良好的生物相容性等特点被认为是一种极具潜力的生物材料,为将来口腔医学的治疗提供应用前景。目的:综述自组装肽在牙体牙髓牙周病学领域的应用以及将来可能面临的挑战及走向。方法:以"self-assembling peptides,periodontal disease,dental pulp stem cells,Regenerative Medicine,tissue engineering,Dental Pulpcytology"为英文检索词,以"自组装肽、牙周病、牙髓干细胞、再生医学、组织工程、牙髓细胞学"为中文检索词,在中国知网、万方数据和PubMed数据库检索有关于自组装肽研究的相关文献,检索时限为2005-2021年,应用摘要检索进行检索。最终选用参考文献共63篇,并进行系统的归纳、总结和分析,对自组装肽在口腔医学领域的研究新进展及挑战进行全面阐述。结果与结论:(1)自组装肽是由氨基酸分子通过分子内/分子间相互作用结构发生自发和可逆地组装过程的一种生物纳米材料。(2)大量实验研究表明,自组装肽作为一种支架可以促进细胞的增殖、分化、迁移和产生细胞外基质成分,还可诱导血管形成,从而被广泛应用牙体牙髓及牙周组织再生。(3)然而目前其仍存在一些不足,如不同状态下稳定性的可变性,机械性能欠缺及不确定的免疫原性等,这提示未来研究中应将重点更侧重于如何增强结构的稳定性,提高机械强度及设计出更加功能化的自组装肽支架。(4)现阶段大量基础研究都趋向性地表现出自组装肽与牙髓干细胞联用较牙髓干细胞单独使用有更多组织再生和成骨的能力。(5)由于自组装肽具有自身稳定性方面的劣势,当其应用到临床上时展现的长期疗效还需要更多的临床试验来证实,但这不阻碍其成为未来研究的热点,从而为牙体牙髓牙周病学领域领域的治疗策略开辟新道路。

摘要：背景:再血管化在组织再生中起着决定性作用。由于牙髓有其独有的结构特点,其四周为坚硬的牙本质包裹,仅从狭小的根尖开口获得血供,因此再血管化在牙髓再生中难度增加。目的:从信号因子、支架和细胞的设计3个角度出发,阐述牙髓再生中促进血管化策略的研究进展。方法:检索PubMed数据库及中国知网数据库收录的相关文献。英文检索词为“dental pulp regeneration,revascularization,growth factor,material,scaffold,dental pulp stem cell,prevascularization,coculture”,中文检索词为“牙髓再生、血管再生、生长因子、材料、支架、牙髓干细胞、预血管化、共培养”,最终纳入69篇文献进行归纳总结。结果与结论:①促血管生成因子主要包括血管内皮生长因子、血小板来源生长因子和成纤维细胞生长因子等,通过促进内皮细胞和血管周细胞的增殖、迁移,促进干细胞的募集和向内皮细胞的分化来促进血管的生成和稳定。②为了维持微环境中适宜的促血管生成因子浓度,向支架上添加肝素、硅酸锂镁和纤维素纳米晶等化学材料,可以溶解包裹、吸附、共价交联信号因子,模拟体内信号因子储存、释放机制,而天然材料包括脱细胞牙髓基质、富血小板血浆和富血小板纤维蛋白等本身富含多种生物活性分子,且自身结构可保护并控释这些信号因子。③牙髓干细胞中不同细胞亚群有不同的成血管潜能,而通过生物、化学等载体可以转染干细胞以提高细胞分泌信号因子的能力,也可以促进干细胞向内皮细胞转化,转染后的细胞成血管能力显著提升,而将干细胞和内皮细胞共同植入体内也可以提升成血管能力。④预血管化或可成为促进牙髓再生快速血管化最有力的手段,在体外将内皮细胞和干细胞以一定比例共培养可以制备出含血管结构的微组织,也可以通过酶消化脂肪组织得到微血管碎片,其中的管状结构和功能细胞能促进植入体内后新生血管的发育,并和宿主血管的吻合。⑤目前针对牙髓再生血管化的临床研究仅限于牙髓血运重建术,即在刺激根管内血凝块形成的同时加入特定种类的信号因子并观察其效果,而其他研究方向主要涉及的是小型、大型动物体内实验,未来仍需进一步进行临床试验以观察再生效果、减轻副反应,并优化制备流程。

摘要：目的研究hsa-miR-130b-3p对人DPSCs重编程为iPSCs的影响。方法设计合成LV3(H1/GFP&Puro)-hsa-miR-130b-3p-mimics质粒,Lipofectamine 3000将质粒转染到人DPSCs,荧光显微镜观察细胞,RT-qPCR验证转染效率。Sendai reprogramming kit将2组DPSCs重编程为iPSCs(实验组为miR-130b-3pDPSCs,对照组为DPSCs),对比2组iPSCs克隆形态和重编程效率,RT-PCR检测Oct4、Nanog、KOS、Klf4、c-Myc的表达。结果hsa-miR-130b-3p过表达质粒转染48 h后在DPSCs内有明显表达,证实高效的转染效率(P<0.01)。Sev重编程得到的2组iPSCs均呈现为扁平致密的圆形克隆,边缘清晰平滑,集落内细胞形态均一、核质比较大,RT-PCR结果表明2组细胞均可表达干细胞特异标志物Oct4和Nanog,同时外源性病毒SeV或转录因子KOS/Klf4/c-Myc不再表达。实验组的重编程效率高于对照组(分别为0.037%和0.018%,P<0.05)。结论hsa-miR-130b-3p可明显促进人DPSCs重编程的效率,为iPSCs应用于牙髓再生治疗提供研究基础。