摘要：牙周炎是以牙龈卟啉单胞菌为主要致病菌的炎症性疾病,与宿主免疫反应密切相关。近年来,牙周炎疫苗的研发备受关注。牙龈卟啉单胞菌表面的多种菌体成分可作为疫苗候选抗原,激发保护性免疫应答,减少牙龈卟啉单胞菌的定植和炎症感染。本文总结了国内外最新研究成果,就牙龈卟啉单胞菌疫苗的免疫原、免疫佐剂等在牙周炎疫苗研发中的应用作一综述。希望通过本篇综述,帮助科研人员进一步确定最佳的免疫方案,优化疫苗设计,为牙周炎的预防和治疗提供重要的科学依据。

摘要：目的　建立牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonasgingivalis,P g)prtH全基因序列的克隆株 ,分析 5株不同P g菌株中prtH基因多态性。方法　利用PCR技术获得prtH全基因序列 ,克隆至载体pGEM T ;设计 3对引物 ,用PCR的方法扩增prtH基因的不同区域 ;以生物素标记prtH基因序列为特异性探针 ,用斑点杂交和Southern印迹杂交进一步分析prtH基因的多态性。结果　酶切分析和DNA测序证实重组质粒pGEM T prtH的插入片段为prtH基因序列 ;核酸分子杂交显示菌株W 381和ATCC 332 77杂交类型一致 ,菌株ATCC 4941 7和菌株 1 4 3 2呈现各自不同的杂交条带 ,而菌株 47A 1中未检测到prtH基因。结论　不同P g菌株中prtH基因序列存在差别 ,这种基因多态性提示不同P g菌株毒力大小可能存在差异。

摘要：目的检测慢性牙周炎患者和牙周健康者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(***)PG0717基因,探讨PG0717基因与牙周临床指数之间的关系。方法选取慢性牙周炎(CP)患者90例和牙周健康者90例,共采集龈下菌斑标本540个;记录临床牙周指数(牙周探诊深度、临床附着丧失和探诊出血);设计特异性引物检测***阳性龈下菌斑标本的PG0717基因。结果在***阳性龈下菌斑中,CP组PG0717基因检出率显著高于对照组,分别为56.22%和41.27%(χ2=4.50,P<0.05);随着牙周探诊深度、临床附着丧失加重和探诊出血趋势的增加,CP组该基因检出率呈现增高趋势。结论PG0717基因与***的致病性有关。

摘要：目的检测牙周健康者及牙周炎患者在颊黏膜和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的阳性率,探讨其与牙周炎发生和发展的关系。方法选取40例牙周健康者和39例慢性牙周炎患者,分别收集颊黏膜和龈下菌斑样本,提取细菌DNA,设计细菌通用引物和牙龈卟啉单胞菌的特异引物用于PCR扩增,检测牙龈卟啉单胞菌的阳性率。结果牙周健康组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为37.5%和32.5%,而牙周炎组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为69.23%和46.15%。牙周炎组菌斑的牙龈卟啉单胞菌阳性率高于牙周健康组,颊黏膜的牙龈卟啉单胞菌阳性率在组间无统计学差异;牙周炎组菌斑牙龈卟啉单胞菌阳性率高于颊黏膜,牙周健康组两部位阳性率无统计学差异。结论牙龈卟啉单胞菌除在菌斑中有高检出率外,在颊黏膜中也有较高的检出率,提示颊黏膜也是牙周细菌在口腔定植的重要部位,牙龈卟啉单胞菌也可在健康人群中检出,提示其有可能是口腔内固有菌群之一。

摘要：【目的】利用Box Behnken响应面法研究免疫球蛋白Y(Ig Y)影响牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)的生长繁殖特性,发现口腔模拟环境中***的响应值与Ig Y剂量、初始***数量、培养时间的关系。【方法】以***最终的菌落数为评价指标,通过单因素试验研究培养时间、Ig Y剂量和初始***数量的最佳条件,再依据Box Behnken中心组合原则设计三因素三水平响应面试验进行优化,评价Ig Y的抑制效果。优化得到的试验条件重复3次,以验证模型的准确性。【结果】单因素试验结果表明,以180 mmol/L的Ig Y剂量,2×10~6 CFU/m L的初始***数量,37°C厌氧培养4 h,口腔模拟环境Ig Y对***繁殖的影响达到最佳状态。通过Design Expert 8.0软件对回归方程的分析得到各因素最佳条件为:Ig Y剂量165 mmol/L、初始***数量2×10~6 CFU/m L、培养时间4.5 h。采用优化实验条件,重复3次试验,***最终菌落数是5.92×10~5 CFU/m L,与模型预测值5.85×10~5 CFU/m L相对误差1%,方差分析表明模型P值显著,缺失值P值不显著,理论值与实测值拟合良好。【结论】Ig Y能显著抑制牙龈卟啉单胞菌的增殖,优化后口腔模拟环境中的***最终菌落数显著降低,回归模型能够预测口腔模拟环境中***的增殖。

摘要：目的:构建重组质粒pPHU281-C-Spec-E,用于敲除菌毛蛋白次要组分基因fimCDE。构建fimCDE缺陷的牙龈卟啉单胞菌,为进一步研究FimCDE在感染中的作用奠定基础。方法:厌氧罐培养牙龈卟啉单胞菌菌株ATCC33277,提取基因组DNA后,PCR扩增获得含有人工设计的酶切位点的fimC基因的上游片段及fimE的下游片段,将其克隆到自杀质粒pPHU281内,命名为pPHU281-C-E;再将抗大观霉素的抗性基因插入到C及E片段之间,最终获得重组质粒pPHU281-C-Spec-E。结果:酶切及DNA序列分析验证重组质粒pPHU281-C-Spec-E构建成功。结论:成功构建了含有牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白次要组分基因fimC上游及fimE下游片段的重组质粒pPHU281-CSpec-E,可用于构建菌毛蛋白次要组分FimCDE缺陷的的突变体。

摘要：目的:比较丝线结扎和涂抹牙龈卟啉单胞菌诱导小鼠牙周炎模型的牙槽骨骨吸收程度、激活破骨细胞及去除诱因后成骨的过程。方法:48只C57BL6小鼠随机分配,采用分口设计,根据涂抹2%(质量分数)羧甲基纤维素(carboxymethylcellulose,CMC)或10~9个菌落形成单位(colony-forming units,CFU)的牙龈卟啉单胞菌以及是否丝线结扎分为4组(n=24),分别为对照组(右上第二磨牙单纯涂抹CMC)、丝线结扎组(围绕左上第二磨牙结扎9-0丝线)、涂菌组(右上第二磨牙单纯涂抹牙龈卟啉单胞菌)和丝线结扎+涂菌组(结扎左上第二磨牙并涂抹牙龈卟啉单胞菌),测量釉牙骨质界至牙槽骨嵴顶(cementoenamel junction to the alveolar bone crest,CEJ-ABC)的距离,监测牙槽骨的吸收。48只C57BL6小鼠设计和分组同上,牙槽骨骨面的破骨细胞采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrateresistant acid phosphatase,TRAP)染色并计数。36只C57BL6小鼠随机分配,其中30只小鼠在左侧上颌第二磨牙结扎9-0丝线,观察3周,有12只小鼠在丝线结扎1周后拆除丝线,继续观察2周,分别在丝线结扎1、2、3周以及丝线拆除1周和2周共5个时间点(n=6)各处死6只小鼠,检测CEJ-ABC距离;未行丝线结扎的小鼠CEJ-ABC距离(n=6)为基线水平。采用单因素方差分析(ANOVA)法对所有数据进行统计学分析。结果:丝线结扎组的小鼠牙周炎,在3、6、9和12周后的CEJ-ABC距离分别为(0.16±0.04)mm、(0.16±0.02)mm、(0.18±0.03)mm、(0.17±0.02)mm,与对照组[(0.09±0.03)mm、(0.10±0.01)mm、(0.12±0.04)mm、(0.12±0.01)mm]和涂菌组[(0.09±0.03)mm、(0.12±0.01)mm、(0.12±0.02)mm、(0.10±0.01)mm]相比差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组[(0.09±0.03)mm]相比,丝线结扎组第3周的CEJ-ABC距离为(0.16±0.04)mm,比涂菌组[(0.09±0.03)mm]诱导的牙槽骨骨吸收更迅速,丝线结扎和涂抹牙龈卟啉单胞菌结合并未进一步增加牙槽骨的吸收破坏。在丝线结扎1 d后,牙槽骨表面的破骨细胞即被激活,与对照组[(2±2)个]相比在第3天达到高峰[(12±4)个,P<0.01]。丝线结扎诱导的小鼠牙周炎,在丝线去除2周后CEJ-ABC距离为(0.07±0.02)mm,与去除丝线前[(0.13±0.01)mm]相比显著降低,提示有显著的牙槽骨再生(P<0.01)。结论:丝线结扎术是一种迅速且有效的诱导小鼠牙周炎牙槽骨骨吸收的方式,其诱导的破骨细胞活化在丝线结扎后24 h内发生,3 d达到高峰,去除实验性牙周炎的诱导因素即去除结扎的丝线有助于牙槽骨骨再生。

摘要：目的:对比牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83之间的差异核苷酸序列,查找高毒力株W83缺失基因。方法:抑制消减杂交技术对比牙龈卟啉单胞菌低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83的基因差异。以低毒力株ATCC 33277为tester,高毒力株W83株为driver,将提取的基因组DNA用内切酶RsaⅠ酶切,连接特殊设计的adaptor进行两次消减杂交和PCR扩增,并与TA克隆载体连接,转化到JM109中,建立差异消减文库,经PCR筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析。结果:经SSH筛选鉴定得到62个片段大小为125～632bp的阳性克隆基因片段。结论:这些差异基因为研究牙周病的发生和发展提供重要线索。

摘要：目的检测慢性牙周炎患者和牙周健康人龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌、总菌量和牙龈卟啉单胞菌所占比例,探讨牙龈卟啉单胞菌与牙周炎发生发展的关系。方法采集经常规PCR方法检测牙龈卟啉单胞菌为阳性的76例慢性牙周炎患者和25例牙周健康者的龈下菌斑,应用TaqMan实时荧光定量PCR方法定量检测样本中牙龈卟啉单胞菌、总菌量;构建含有牙龈卟啉单胞菌和真细菌扩增片断的重组质粒,建立定量标准。结果本研究设计的引物和探针具有良好的特异性及敏感性。病变位点龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌数量和总菌量均比健康位点高(P0.05);细菌数量与探诊深度间存在显著正相关关系(P0.05)。结论龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的数量水平及细菌总量与牙周状况、牙周炎发展有密切关系,实时荧光定量PCR对牙周病学研究具有广泛的应用前景。

摘要：目的对在基础治疗辅助米诺环素治疗慢性牙周炎前后,实时定量检测龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis,Pg)占总细菌构成比。方法收集中、重度慢性牙周炎患者50例,根据随机、自身对照的原则设计分组:未用药侧和药物侧(药物侧牙周基础治疗后牙周袋内放置盐酸米诺环素)。记录治疗前、治疗后1、3个月时各项临床指标,并提取牙周袋内菌斑,应用TaqMan Real-time PCR方法对龈下菌斑进行定量检测,对数据做统计学分析。结果 Pg构成比结果显示:两组治疗前均为68%,两组治疗后1个月未用药侧30%、药物侧28%;3个月时Pg构成比未用药侧24%,药物侧22%,均低于治疗前,差异有显著性意义(P0.05);用药侧治疗后1、3个月与未用药侧比较,差异无显著性意义(P>0.05)。Pg构成比与临床指标探诊深度、出血指数和牙周附着水平成正相关性(P<0.05)。结论牙周病患者经基础治疗后能够减少龈下菌斑中Pg的构成比,而且可以在3个月内保持疗效,其中牙周基础治疗起关键性作用,盐酸米诺环素辅助用药对临床治疗效果的改善不明显。