摘要：为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的IBRV g E和g B基因序列,设计2对特异性引物及Taq Man探针。结果显示,以含有gB、gE基因的重组质粒为模板绘制标准曲线,其相关系数(R^2)均为0.999,有良好的线性关系。该方法仅对IBRV检测为阳性,而对牛支原体、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒、巴氏杆菌、牛、羊布鲁氏菌检测结果均为阴性,表明其特异性强。该方法的敏感度约为2拷贝/μL,重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于2%。根据被OIE采纳的作为国际贸易规定的检测该病毒的荧光定量PCR方法与本实验建立的方法分别对30份牛肺样品进行检测,符合率可达81.8%。研究表明所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于IBRV的检测。

摘要：根据牛传染性鼻气管炎病毒gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化。结果得到与预期大小(362bP)一致的特异性片段。最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPS为0.36mM,引物为0.2pmol/uL,聚合酶0.8U/100uL。用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带。该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100uL,较其他方法敏感。

摘要：为检测牛传染性鼻气管炎病毒,通过设计针对gB基因的特异性引物扩增gB基因,构建阳性重组质粒。经过优化建立了牛传染性鼻气管炎病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果显示,建立的实时荧光定量PCR检测方法在阳性标准质粒拷贝数在5.474×10~4~5.474×10^(9)拷贝/μL时线性关系良好,线性相关系数R^(2)=0.9993。该方法最低检测限为5.747×10^(2)拷贝/μL;可以特异性检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛副流感病毒(BPIV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)不发生交叉反应。病毒滴度与拷贝数的线性关系良好,线性相关系数R^(2)=0.9854。该方法为牛传染性鼻气管炎病毒的快速检测提供了技术支持。

摘要：为了建立有效鉴别牛传染性鼻气管炎病毒（BoHV-1）gg-／tk-基因缺失疫苗人工免疫和BoHV-1野毒株自然感染的鉴别诊断方法，以BoHV-1gG蛋白为抗原建立了间接ELISA（iELISA）抗体检测方法。根据编码BoHV1gG蛋白的基因序列设计特异性扩增引物，以BoHV1基因组DNA为模板扩增gg基因截短片段，克隆至原核表达载体pGEX-6p-1并进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Westernblot分析表明，gg基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可溶性及包涵体2种形式表达，纯化的gG蛋白具有良好的反应原性。将可溶性gG蛋白纯化后作为包被抗原，建立了BoHV-1gGiELISA抗体检测方法，并优化了各反应条件。使用该方法与商业化试剂盒BoHV-1gE和gB阻断ELIsA进行比较检测，并与其他5种牛常见病原体的阳性血清进行交叉反应检测，同时进行了该方法的重复性试验、保存期试验及消长规律试验；最后使用该方法对临床1031份牛血清进行了检测，血清流行率为83．71%,4（95%CI：81．30％～85．90％）。结果显示，该方法的阴、阳性血清检测的临界值（S／P值）为0．398，与进口试剂盒比较显示该方法具有良好的诊断敏感性和特异性，且本试剂盒可在1：50倍样本稀释下进行检测，而商业化试剂盒是1：1倍样本稀释检测。此外，该方法分析特异性良好，与其他非相关病原体的阳性血清无交叉反应；检测重复性良好；在4℃条件下可保存6个月。该方法在人工感染BoHV～1野毒株和人工免疫BoHv-1gg-／tk-疫苗株20d后可以明显区分疫苗株免疫和野毒株感染。综上所述，本研究成功建立了BoHV-1 gG iELISA抗体检测方法，敏感性和特异性良好，既可以用于有效鉴别疫苗免疫和自然感染，也可作为BoHV-1的血清学诊断方法。

摘要：为利用荧光定量PCR技术建立一种快速检测牛传染性鼻气管炎病毒的方法,根据牛传染性鼻气管炎病毒保守基因gB和gE分别设计2对引物及相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度,建立相对定量标准曲线,并进行特异性检验。结果表明,2组荧光PCR的标准曲线相关性好,相关系数均为0.99,此方法特异性、灵敏性好。

摘要：为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的双重PCR检测方法,根据GenBank中登录的IBRV gE和gB基因序列,设计2对特异性引物。结果表明,建立的方法特异性强,对牛支原体、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒、巴氏杆菌、牛和羊布鲁菌进行检测,结果均为阴性。研究表明,所建立的双重PCR检测方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于IBRV的检测。

摘要：为快速定量检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV),本研究根据IBRV的 D基因保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了能够快速检测IBRV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法与引起牛消化道和呼吸道疾病的其它几种病毒均无交叉反应,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对质粒标准品的最低检出限达6.1×10~1拷贝/μL,敏感性较高且高于普通PCR方法;重复性实验结果显示,批内、批间变异系数均小于3.0%,重复性良好。利用该方法检测了3个规模化奶牛场送检的47份奶牛鼻拭子样品,结果显示检出了12份阳性样品,与常规PCR检测方法的相比,总符合率为97.87%。本研究建立的检测IBRV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法准确可靠,为IBRV的早期快速检测和定量分析提供了技术支撑。

摘要：〔目的〕建立牛传染性鼻气管炎的PCR检测方法。〔方法〕根据牛传染性鼻气管炎病毒的gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化。〔结果〕得到与预期大小(362bp)一致的特异性片段。最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPs为0.36mM,引物为0.2 pmol/μL,聚合酶0.8U/100μL。用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带。〔结论〕该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100μL,较其他方法敏感。

摘要：[目的]针对牛传染性鼻气管炎病毒建立快速、准确而敏感的分子生物学检测方法,为进出口牛及其遗传物质的IBR检疫把关提供新的技术手段。[方法]采用新型实时荧光PCR技术原理,自行设计荧光标记引物建立检测方法,对不同牛传染性鼻气管炎病毒样品进行敏感性、特异性等检测试验,并与常规PCR检测方法进行比较。[结果]该方法能特异检测IBR病毒,检测时间包括核酸样品制备仅需2h,敏感性比常规PCR检测方法提高达103-104。[结论]本方法适用于在牛及其遗传物质的进出口检疫中进行牛传染性鼻气管炎快速病原鉴定。