摘要：为鉴别检测引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原,包括牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒(BPIV),本研究分别以IBRV g B基因、BVDV 5′-UTR基因、BRSV N基因和BPIV HN基因为靶基因,通过BLAST比对,基于靶基因的保守区域设计引物,经过反应体系优化,建立了检测IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的单一和多重SYBR GreenⅠ实时PCR方法。结果显示,建立的方法检测灵敏性高,对IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的最低检测限分别为5.86×10^(1)、5.02×10^(1)、1.02×10^(2)和2.42×10^(1)copies/μL。检测特异性强,仅IBRV、BVDV、BRSV和BPIV为方法阳性,其他病毒均为阴性。采集了259份临床表现为呼吸道疾病症状的牛血液样本,利用建立的方法进行检测,结果显示,阳性检出率分别为BVDV 22.78%、BPIV 11.97%、IBRV 5.02%、BRSV 31.66%,经基因测序复核,本方法的检测准确率为100%。此外,在阳性样本中存在多种病毒混合感染的情况,其中BRSV和BVDV混合感染率为5.02%,BRSV和BPIV混合感染率为3.47%,BPIV和BVDV混合感染率为1.93%,BRSV和IBRV混合感染率为1.16%,BRSV、BVDV和BPIV混合感染率为0.39%。以上结果表明,本研究建立的方法具有良好的检测灵敏性、特异性和准确性,可同时检测IBRV、BVDV、BPIV和BRSV,为病毒性牛呼吸道疾病综合征主要病原的快速检测和流行病学调查提供了必要的技术支持。

摘要：为建立对牛呼吸道疾病综合征(BRDC)进行快速而准确的病原学检测方法,基于牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g B 基因、牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 5′UTR 基因、牛副流感病毒 3 型(BPIV3)HN 基因和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV) N 基因设计检测引物,经过条件优化,建立了检测 IBRV、BVDV、BPIV3 和 BRSV的多重 PCR 方法。 该方法具有良好的特异性和灵敏性,可特异性地同时检测 IBRV、BPIV3、BRSV 和 BVDV,灵敏度分别为 5.86×10^(3)、2.42×10^(3)、1.02×10^(4)和 5.02×10^(4)copies/ μL,且重复性良好。 利用该方法对采集的309 份具有呼吸道症状牛的鼻腔拭子进行检测 ,结果显示 ,IBRV、BVDV、BPIV3 和 BRSV 的阳性率分别为6.15%、28.16%、18.12%和 33.66%,其中 BVDV 与 BRSV 的混合感染率为 5.18%,BVDV 与 BPIV3 的混合感染率为 1.62%,BRSV 与 BPIV3 的混合感染率为 4.21%,BVDV、BRSV 与 BPIV3 的混合感染率为 0.97%。该多重 PCR 方法的建立为 BRDC 主要病毒的鉴别检测及流行病学调查提供了必要的技术支撑。

摘要：为建立同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)这5种牛呼吸道病毒的方法,根据BVDV的5′UTR、IBRV的gB基因、BRSV的N基因、BCoV的N基因、BPIV3的HN基因序列设计特异性引物,建立了一种多重PCR检测方法。结果显示,该方法对其他牛源病毒及细菌无特异性扩增,对BVDV、IBRV、BRSV、BCoV、BPIV3的最低检测限分别为10^(3),10^(3),10^(4),10^(3),10^(4)拷贝/μL。对采集自宁夏地区186份鼻拭子样本的检测结果显示,BVDV、IBRV、BRSV、BCoV、BPIV3阳性检出率分别为8.06%(15/186),10.75%(20/186),15.05%(28/186),16.67%(31/186),7.53%(14/186),与单重PCR检测结果一致。结果表明,本试验建立的多重PCR检测方法可用于牛呼吸道病毒的检测及流行病学调查。

摘要：为建立检测牛疱疹病毒(BHV-1)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单一或混合感染的荧光PCR检测方法,根据BHV-1gB基因、BRSVF基因、BPIV-3 M基因和BVDV 5’UTR基因保守区序列分别设计特异性引物和TaqMan荧光探针,经条件优化,成功建立了BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV的四重荧光PCR检测方法。该方法对牛布鲁氏菌、猪瘟病毒、小反刍兽疫病毒、羊多杀性巴氏杆菌无特异性扩增;对BHV-1、BPIV-3和BVDV的最低检测量均为8.268 copies/μL,对BRSV的最低检测量为82.680 copies/μL;该方法重复性好,CV值为1%~2%。应用本方法检测采自湖南省内某屠宰场的865份样品,结果BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV等4种病原均有检出,其阳性率分别为0.58%,0.81%,0.23%和0.81%。本研究建立的多重荧光PCR检测方法可同时对BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV进行检测,为这4种病原的快速诊断和鉴别提供了技术支撑。

摘要：为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV和BPIV-3的双重PCR检测方法。采用该方法检测BRSV和BPIV-3参考毒株,特异性良好。对参考毒株进行梯度稀释检测,结果该方法检测BRSV的敏感性可达10 TCID50·100μL-1,BPIV-3可达10 TCID50·100μL-1。应用建立的双重PCR方法能够从临床样品中检测出BRSV和BPIV-3。表明建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,可用于BRSV和BPIV-3的临床检测。