摘要：鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行pcr扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴别引物,对pcr反应条件进行优化,并进行适用性及准确性考察。当退火温度为62℃,循环次数为35,使用设计的鳖甲特异性鉴别引物Biejia-272.F/R进行pcr扩增,鳖甲药材、饮片及醋鳖甲均扩增获得约300 bp的特异性鉴别条带,混伪品无条带。该方法可作为一种快速准确鉴别鳖甲正伪品的鉴定方法。

摘要：绵羊肺腺瘤是由外源性反转录病毒JSRV引起的接触性传染的肺肿瘤性疾病。感染羊没有针对JSRV的循环抗体,但在感染羊的肺肿瘤组织、淋巴网状系统及外周血单核细胞中可检测到外源性前病毒exJSRV及JSRV转录产物。健康羊基因组中存在15~20拷贝的内源性前病毒enJSRV,内外源性前病毒的结构基因高度相似,而在U3区存在差别,因而,设计了针对exJSRVU3区的特异性引物并在国内首次建立了一步法特异性pcr检测法及套式pcr检测法。以700ng健康羊基因组DNA为背景,梯度稀释阳性质粒pJSRV-LTR作为模板,比较两种方法的敏感性,结果表明套式法的敏感性是一步法的10倍以上,套式法也是目前可用于检测感染羊血液样品的唯一方法,可望在绵羊肺腺瘤病的流行病学调查及防控方面起重要作用。

摘要：建立一种鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无的DNA分子标记鉴别方法。通过测序获得延胡索、齿瓣延胡索、夏天无及其近缘种14种共56个样品的mat K,trn G和trn H-psb A序列,利用Bio Edit 7. 2. 2软件比对获得SNP位点,根据变异位点设计AS-pcr鉴别引物,并优化pcr条件,根据特异性条带分别对延胡索、齿瓣延胡索和夏天无进行鉴定。结果显示模板量(0. 6~1 200 ng)和退火温度(42~60℃)对扩增结果影响较小,循环次数对扩增结果影响较大。在循环数为20时,延胡索、齿瓣延胡索和夏天无分别扩出297 bp(mat K)、353 bp(trn G)和544 bp(mat K)的特异性条带。该研究所建立的方法对延胡索的最低检测限为6 ng,对夏天无的最低检测限为60 ng,齿瓣延胡索低于0. 6 ng。该文所建立的位点特异性pcr法能特异性鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无。

摘要：柑橘半穿刺线虫Tylenchulus semipenetrans侵染柑橘后可导致树势缓慢性衰退,引起柑橘慢衰病,植株表现症状与盐分胁迫、缺素等引起的黄化症非常相似,导致农户常采取不当的防治措施而加重经济损失。目前,柑橘半穿刺线虫的分子检测方法较多,但耗时长、灵敏度较差(Song et al.,2017)。为提高该线虫分子生物学检测的特异性和灵敏度,基于其ITS序列设计1对特异性pcr扩增引物,并对其进行特异性和灵敏度检测,以期为柑橘慢衰病的检测、监测及综合治理提供理论依据。

摘要：筛选获得草珊瑚与金粟兰鉴别的特异位点并建立双位点特异性pcr方法,用于鉴别草珊瑚与金粟兰叶片以及两者的混杂品。采集不同产地的草珊瑚18份、金粟兰6份,所有样品提取总DNA,并对草珊瑚与金粟兰干燥叶片进行DNA提取。通过对其ITS片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的草珊瑚与金粟兰的ITS序列,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物,构建多重pcr体系,并优化pcr条件,对草珊瑚与金粟兰叶片进行快速分子鉴定。构建了多重pcr鉴别体系,只经一个pcr反应,能扩增出草珊瑚580 bp的特异性鉴别条带及金粟兰470 bp的特异性片段,可快速鉴别草珊瑚与金粟兰叶片,并可判断相互是否混杂。使用双位点特异性pcr技术可以有效快速鉴别草珊瑚与金粟兰叶片,并可判断相互是否混杂。

摘要：目的利用特异性引物对浙贝母Fritillaria thunbergii进行特异性pcr鉴定。方法回收RAPD扩增筛选到的浙贝母分子标记ZB1基因,将其连接进入T-载体克隆并测序。根据测序结果设计一对特异性引物P2/P3,以贝母基因组DNA为模板进行特异性pcr扩增。结果特异性pcr鉴定结果为浙贝母在约750 bp处出现特异性条带,其他贝母品种则未出现条带。结论浙贝母特异性pcr鉴定方法操作简单,准确、灵敏、重复性好,具有较好的应用前景。

摘要：目的:研究断肠草与金银花类药材水提液的DNA分子鉴别方法。方法:采集不同产地的断肠草药材13份、金银花32份、山银花21份和水银花5份,所有样品提取总DNA,并对断肠草、金银花、山银花的水提液进行DNA提取。通过对断肠草ps-bA-trnH片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的中金银花类药材基原植物psbA-trnH序列,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物。结果:通过使用特异性引物对所有样品进行pcr扩增,发现断肠草可扩增出97 bp片段,而金银花类药材则不能扩增出条带。结论:通过特异性pcr的方法实现了断肠草与金银花类药材水提液的快速、准确鉴别。

摘要：目的:基于PsbA-trnH片段,利用测序技术寻找野生和栽培地黄此区域序列差异位点,为地黄野生和栽培种的分子鉴定提供依据。方法:提取地黄叶片的DNA,以PsbA-trnH序列通用引物进行pcr扩增,扩增产物经纯化后测序,利用MEGA 7.0软件比对寻找差异位点,基于差异位点设计特异性引物,采用两步法进行pcr扩增,优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性考察。结果:建立了野生和栽培地黄的位点特异性pcr鉴别方法:引物的序列为ZP1-F:TTT AGT ATT TAA TAT TTG AT,ZP1-R:CAA ATT CGA CTT TTT GCT GA;反应体系:2×Taq Plus Master Mix 12.5μL,上下游引物各1μL(10μmol/L),DNA模板1μL,ddH2O 9.5μL;扩增程序:95℃1 min;95℃10 s,39℃30 s,30×;72℃15 s。栽培地黄均能在100~200 bp之间扩增出2条条带,野生地黄无条带,方法的适用性和普适性良好。结论:本次实验所建立的特异性pcr鉴别方法可作为野生种和栽培种地黄鉴定准确而有效的分子方法。

摘要：为建立快速准确的艾纳香分子鉴定方法。采取筛选艾纳香及其混伪品基因组DNA的提取方法,针对艾纳香特异性位点设计引物,优化pcr扩增条件,荧光检测扩增产物。结果表明碱裂解法更适于艾纳香基因组DNA的提取;叶绿体基因(t DNA)特异引物能特异性扩增艾纳香DNA,其扩增产物荧光检测呈绿色,混伪品无反应发生。试验结果显示该法简化了分子鉴定过程,省时节力,且结果准确可靠,可作为艾纳香植物和药材的鉴定方法。

摘要：目的：建立一种高效、准确的中药材海龙及其常见混伪品的特异性聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,pcr）鉴别方法。方法：通过比较海龙及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因（cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ）基因序列差异,根据变异位点设计刁海龙、尖海龙及拟海龙的特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上,将3对特异性引物组合,构建多重pcr体系。结果：在多重pcr体系中,刁海龙能扩增出485 bp片段,尖海龙可扩增出120 bp片段,拟海龙可以扩增出240 bp片段,其他混伪品均无条带。所设计的特异性鉴别引物具有高度的特异性。结论：该文所建立的位点特异性pcr鉴别方法可实现海龙的准确鉴别。