摘要：根据枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌基因组中β-甘露聚糖酶基因上下游序列设计3对种特异引物。以中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)保藏的33株枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌作为参考菌株,利用特异pcr方法对3种枯草芽孢杆菌群细菌进行鉴定区分。结果表明该特异pcr方法能够有效区分枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌。

摘要：【目的】植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(***)、嗜酸乳杆菌(***)和德氏乳杆菌(***)是微生物肥料生产中常用的乳酸菌,它们表型特征相似,若采用传统方法鉴定则费时费力,为准确、快速地鉴定这些种,建立种特异pcr方法。【方法】利用NCBI中Primer-BLAST(引物设计和特异性检验工具),以GenBank数据库中上述菌种的recA和gyrB为靶基因,设计和筛选种特异性引物从而建立相应特异pcr鉴定方法。【结果】经过乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、片球菌属(Pediococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、短芽孢杆菌属(Brevibacillus)和假单胞菌属(Pseudomonas)7个属24个种共40株标准菌株的实验验证,4个目标种分别扩增出唯一的目的产物,而其他种均无目的扩增产物。采用建立的4种特异pcr方法对产品中分离的16株乳杆菌进行鉴定,结果与16S rDNA序列分析、Biolog鉴定结果一致。【结论】建立的特异pcr鉴定方法均具有较高的种内通用性和种间特异性,可快速、准确的用于微生物制剂中植物乳杆菌、德氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌的检测和鉴定,具有较好的应用前景。

摘要：普通高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris)具有产生多种耐热酶的能力,在淀粉深加工、皮革制造、高温堆肥生产以及分子生物学等领域中均有重要应用,应用常规技术鉴别费时费力,无法满足普通高温放线菌筛选及其应用研究的要求,有必要建立一套快速、准确的鉴别方法。该研究根据普通高温放线菌的gyr B基因分别设计了普通高温放线菌的特异性引物,建立了快速筛选普通高温放线菌的特异pcr方法。实验结果表明所设计的特异性引物对普通高温放线菌具有较高的特异性,可以快速鉴别普通高温放线菌,与传统的菌种鉴定方法相比,具有高效、灵敏、便捷及成本低廉等显著优点。

摘要：根据中间型高温放线菌的gyrB基因设计了中间型高温放线菌的特异性引物,建立了快速筛选中间型高温放线菌菌种的特异pcr方法,并将其应用于芝麻香型白酒高温大曲中的中间型高温放线菌筛选。结果表明,所设计的特异性引物对中间型高温放线菌具有较高的特异性,可以快速鉴别中间型高温放线菌菌种,并成功从芝麻香型白酒高温大曲中快速筛选获得中间型高温放线菌,与传统的菌种鉴定方法相比,具有高效、灵敏、便捷及成本低廉等显著优点。

摘要：针对光合细菌传统的菌种鉴定方法和MPN定量方法存在费时、费力和准确性差的问题,本研究建立了光合细菌特异pcr鉴定技术和实时荧光pcr定量的检测技术.以微生物肥料产品常用的光合细菌沼泽红假单胞菌和类球红细菌作为研究对象,分别依据16SrDNA序列和gyrB序列设计出具有种水平特异性的引物,优化并确定了pcr反应条件,其灵敏度达到100pg/μL,对6个光合细菌产品鉴定的符合率为100%,结果表明建立的pcr鉴定技术具有特异性、灵敏性和实用性.再根据16SrDNA的保守序列设计了常用光合细菌通用引物,用其对系列稀释的已知菌含量样品的DNA模板进行荧光定量pcr,制作标准曲线.对10个光合细菌样品进行荧光定量pcr法测定,根据与标准曲线比较得出样品中的光合细菌含量,其结果与MPN法的相关系数为0.98,两者具有良好的相关性,结果表明建立的荧光定量pcr法可用于光合细菌的定量检测,并具有高特异性和快速等优点.

摘要：以多年生簇毛麦（Dasypyrum breviaristatum）基因组DNA为模板,用小麦种子醇溶蛋白保守引物进行pcr扩增。扩增产物经克隆测序,获得999-1018bp的7个序列（GenBank登录号为EU186102-EU186108）,分别编码283-290个氨基酸。序列比对结果表明,它们具有α-醇溶蛋白基因的保守特征,是α-醇溶蛋白基因家系成员。该7个序列与乳糜泻（celiac disease）病人毒性抗原相关序列的比对结果表明,有5个序列在C末端具有Glia-α-2型抗原序列的特征。根据α-醇溶蛋白基因的编码氨基酸建立系统树,发现来自多年生簇毛麦的α-醇溶蛋白基因序列单独聚为一类,不能与普通小麦A、B或D染色体组的相关序列聚在一起。在序列分析的基础上设计了簇毛麦基因组α-醇溶蛋白基因的特异引物AS-V-gli-F和AS-V-gli-R,通过特异pcr扩增,AS-V-gli-F和AS-V-gli-R仅能对多年生簇毛麦、小麦-多年生簇毛麦部分双二倍体进行特异性扩增,而不能对小麦和其他小麦族物种进行扩增。因此,AS-V-gli-F和AS-V-gli-R可作为检测多年生簇毛麦α-醇溶蛋白基因向栽培小麦转移的分子标记。

摘要：为了建立犬源环孢子虫的pcr检测方法,根据该环孢子虫18SrDNA基因序列,设计1对特异性引物;通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件,进行了特异性和敏感性试验;并对临床样品进行了检测。结果显示,该pcr检测方法能特异性地扩增出犬源环孢子虫18SrDNA中379bp的片段,与牛源环孢子虫、柔嫩艾美耳球虫、人隐孢子虫、蓝氏贾第虫、刚第弓形虫、毛首线虫、大片吸虫、犬弓首蛔虫等8种虫体基因组DNA无交叉反应;最低能检测到84fg的阳性参照DNA,检测的157份临床样品中8份为阳性,比传统镜检方法多出3份。结果表明,建立的pcr检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于犬环孢子虫的临床检测。

摘要：以多年生簇毛麦、普通小麦中国春、山羊草等为材料,用142个10碱基随机引物进行RAPD分析,筛选出1个簇毛麦的特异性RAPD片段,经克隆测序得其全长为1 182 bp(登录号DQ167398),被命名为OPH121182。序列比对结果显示,OPH121182与栽培大麦中的反转重复序列Sabrina有95%的同源性,表明OPH121182也是一类反转重复序列。原位杂交结果显示,pDbH12在多年生簇毛麦所有染色体上除端部和着丝点以外的所有区域均具有很强的杂交信号,说明OPH121182是簇毛麦基因组的一个特异高度重复序列。进一步以OPH121182的DNA序列为基础设计特异pcr引物,对供试材料进行扩增,表明OPH121182分布在簇毛麦全部染色体上,可作为分子标记检测具有簇毛麦染色质的后代和小麦-簇毛麦双二倍体。

摘要：病原菌中的疏水蛋白在病原菌与寄主植物互作的过程中起着重要的作用。本研究利用BLAST工具从NCBI数据库公布的58个疏水蛋白序列中筛选得到18条稻瘟病病原菌基因组中具有潜在疏水蛋白功能的ORF,选取其中的11条ORF设计特异引物,检测其在17个稻瘟病病原菌中的分布状况。同时,利用序列比对工具ClustalX和Mega3.0软件的邻接法,对筛选的58条已知疏水蛋白序列构建疏水蛋白的系统进化树。研究结果表明:经pcr检测,在11对引物中有4对引物高度专一且所得片断与预期大小基本一致,6对引物扩增不特异,1对引物扩增无特异条带。通过系统进化树分析得知,疏水蛋白间的平均分离度为0.62,筛选的58条疏水蛋白可分为两大类:ClusterⅠ和ClusterⅡ,分别与真菌疏水蛋白Ⅰ型和Ⅱ型相对应;所有的担子菌、稻瘟菌和绿僵菌中的疏水蛋白构成ClusterⅠ,其它真菌的疏水蛋白构成ClusterⅡ。本试验的研究将为进一步明确稻瘟病病原菌中的疏水蛋白分布状况,以及相关基因的功能验证奠定基础。