摘要：狂犬病病毒(Rabies Virus)是一种致死性的人畜共患病。为了深入研究狂犬病病毒的基因组特性及构建新型病毒载体,研究根据GenBank中已公布的狂犬病病毒口服疫苗株srv9(登录号:AF499686)基因组序列设计数对引物,以srv9病毒为材料,通过RT-PCR技术将总RNA中srv9全长基因组11,928 bp分5段扩增,分别克隆到pMD18-T或pGEM-T载体测序鉴定。测序正确后,再克隆至pBluescript skⅡ(+)载体,利用扩增片段自身内切酶切位点顺次进行全长连接,获得含srv9全长基因组的质粒pBLsrv9。通过基因组序列同源性比较分析,srv9株具有稳定的遗传特性,为进一步探索狂犬病病毒的复制、感染、致病及免疫分子机制和研制新型狂犬病病毒疫苗奠定良好的基础。

摘要：【目的】重组狂犬病病毒srv9株磷酸化蛋白的P基因和基质蛋白的M基因,为构建狂犬病毒(srv9)全长c DNA提供技术支撑。【方法】设计重组PCR引物,分别扩增srv9的P基因和M基因,构建重组质粒p MD18-PM,并对重组质粒进行酶切、测序鉴定。【结果】PCR扩增的srv9的P基因和M基因大小分别为893 bp和608 bp,与Gen Bank已发表的狂犬病病毒srv9(登录号:AF499686)序列比较,同源性分别为99.66%和99.67%。融合基因PM片段大小为1 501 bp,与预期大小相同,且融合完全。【结论】应用重组PCR成功融合狂犬病病毒srv9磷酸化蛋白P基因和基质蛋白M基因,为后续构建病毒全长c DNA及感染性克隆奠定基础。

摘要：狂犬病病毒srv9株是经克隆获得的中等蚀斑口服弱毒疫苗候选株,具有安全和免疫原性较好等优点。本试验根据狂犬病病毒糖蛋白核苷酸5’末端和3’末端序列设计了一对引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增了 srv9及其母源株SAD B19糖蛋白的全长cDNA。测序结果表明,srv9和SAD B19糖蛋白cDNA读框长1575bp,编码524氨基酸残基的多肽。通过和其母源株SAD B19核苷酸序列比较发现,srv9的158、575、931位碱基分别出现了G→A、A→G和A→G的转换,相应地导致第53位、192位、311位氨基酸出现了Gly→Glu、His→Arg、Thr→Ala突变;和我国现行的犬用疫苗株ERA的核苷酸和氨基酸比较,有10个碱基不同.7个氨基酸发生改变。经Jameson-Wolf抗原表位优势图分析发现,srv9在192位氨基酸的改变,导致该部位产生了一个新的潜在抗原位点。由于狂犬病病毒糖蛋白是诱导机体产生中和抗体唯一抗原,因此,上述氨基酸的改变可能与其特殊的蚀斑特性和其安全性提高有关。保持对毒株的氨基酸序列分析也是监测其特性的重要手段之一。