摘要：为了解云南省怒江州独龙牛贾第虫的感染情况及基因型,本试验分4个季节从怒江州怒江流域(古泉村、亚左洛村、鸠门当村、茨开镇)和独龙江流域(独龙江乡)5个地点采集987份独龙牛粪便标本,基于贾第虫的BG基因序列设计引物,采用巢式PCR方法对粪便DNA样本进行扩增。结果显示:贾第虫阳性样本共有102份,总感染率为10.33%,其中古泉村、亚左洛村、鸠门当村、茨开镇和独龙江乡感染率分别为10.19%(21/206)、13.90%(26/187)、11.98%(23/192)、8.33%(19/228)和7.47%(13/174),亚左洛村与独龙江乡之间感染率差异显著(P0.05);春、夏、秋、冬4个季节贾第虫感染率分别为12.05%(30/249)、10.55%(25/237)、8.68%(23/265)、10.17%(24/236),差异不显著(P>0.05);共鉴定出集聚体A、B和E三种基因型,均为人兽共患基因型。结果表明,怒江州独龙牛存在贾第虫感染,且存在人兽共患的风险,影响公共卫生安全,需采取相应措施进行预防。

摘要：为了了解云南省怒江州独龙牛芽囊原虫的感染情况及基因型,试验分4个季节从怒江州怒江流域(古泉村、亚左洛村、鸠门当、茨开镇)及独龙江流域(独龙江乡)5个地点采集到987份独龙牛粪便样本,基于芽囊原虫的18S rRNA基因序列设计引物,采用常规PCR方法对粪便DNA进行扩增,琼脂糖凝胶电泳后对阳性样本进行测序分析。使用Clustal X 1.83软件和BLAST程序对测得序列在GenBank上与芽囊原虫参考序列进行同源性比对,通过MEGA-X软件计算序列之间的遗传距离,采用邻接法(NJ)构建系统进化树,以SPSS 19.0软件对感染率进行统计分析。结果表明:共得到119份芽囊原虫阳性样本,与GenBank中单峰驼芽囊原虫SSU rRNA基因序列(KC148207.1)相比,同源性为97.06%~98.92%;与牛芽囊原虫SSU rRNA基因序列(KC148205.1)相比,同源性为96.86%~98.19%,鉴定出ST10、ST14两种基因亚型。独龙牛芽囊原虫的总感染率为12.06%,其中古泉村、亚左洛村、鸠门当、茨开镇、独龙江乡感染率分别为7.28%、12.30%、19.27%、12.28%、9.20%,鸠门当采样点芽囊原虫的感染率与其他采样点比较差异显著(P0.05)。春夏秋冬4个季节芽囊原虫感染率分别为8.03%、11.39%、10.94%、18.22%,春季芽囊原虫感染率最低,冬季最高,两者比较差异显著(P<0.05)。说明怒江州独龙牛存在芽囊原虫感染,不同采样点的芽囊原虫感染率存在差异,冬季芽囊原虫感染率最高,需采取相应措施进行预防。

摘要：为了了解云南省独龙牛环孢子虫(Cyclospora)的分子流行病学情况,试验分四个季节从云南省怒江流域(鸠门当、古泉村、茨开镇、亚左洛村)和独龙江流域(独龙江乡)共五个地点采集1129份独龙牛粪便样本,根据环孢子虫的18S rRNA基因序列设计引物进行巢式PCR扩增,以限制性内切酶BspEⅠ进行限制性片段长度多态性(RELP)分析。利用BLAST工具对测得的序列与NCBI上已发表的环孢子虫18S rRNA基因序列进行比对分析,通过生物学软件MEGA 6.0计算遗传距离并采用邻接法(NJ法)构建遗传进化树,以统计学软件SPSS对感染率进行分析。结果表明:从1129份粪便样本中共检测出17份环孢子虫阳性样本,对测得序列进行同源性分析发现,5份样本与人环孢子虫亲缘关系较近(98.5%~99.4%),11份样本与广州牛源环孢子虫亲缘关系较近(94.4%~98.8%),1份样本与其他种类环孢子虫亲缘关系较远。独龙牛环孢子虫的总感染率为1.51%(17/1129),怒江流域和独龙江流域的感染率分别为1.00%(9/903)和3.54%(8/226),两者比较差异显著(P0.05)。说明云南省独龙牛存在环孢子虫感染,地点是独龙牛感染环孢子虫的影响因素,独龙江乡的感染风险较高,当地应做好防控工作。

摘要：稀释液是影响动物精液体外保存效果的重要因素。研究半胱氨酸、精氨酸和甘氨酸;丙三醇、乙二醇和二甲基乙酰胺;果糖和葡萄糖对独龙牛精液冷冻、解冻的效果。优化实验采用正交设计并使用L9(3^(4))正交表安排试验,初选出冷冻保存效果较好的稀释液配方,再用选出的最佳组合稀释液配方进行对比试验,优选出理想的冷冻稀释液。冷冻稀释液中添加适量的半胱氨酸、精氨酸和甘氨酸;丙三醇、乙二醇和二甲基乙酰胺;果糖和葡萄糖有利于独龙牛精子生存和冷冻保存。三种氨基酸以半胱氨酸保存效果最好;抗冻剂中丙三醇保存效果最优;糖类以果糖效果较佳。所实验的6个稀释液配方以A_(2)B_(11) C_(2)〔即半胱氨酸0.25 g、果糖0.5 g、丙三醇6 mL、三(羟甲基)氨基甲烷2.42 g、柠檬酸1.36 g、卵黄20 mL,双蒸水加至100 mL〕效果最好,稀释后精子活力(67.34±3.38)%、解冻活力(38.18±4.39)%、精子解冻复苏率(56.65±5.72)%。