摘要：本试验旨在建立检测猪增生性肠炎(porcine proliferative enteropathy,PPE)的套式PCR方法,为临床快速鉴别诊断和防控该病提供病原学依据。根据GenBank上已发表的的劳森氏胞内菌(Lawsonia intracellularis,LI)的基因组序列(登录号:AM180252)设计2对特异性引物,以疑似PPE病猪粪便中纯化的DNA为模板,建立了套式PCR方法,并对PCR产物进行序列测定,所扩增的序列与GenBank上登录的劳森氏胞内菌相应序列的同源性在99%以上。应用本试验建立的套式PCR方法对疑似PPE病猪的粪便进行检测,结果表明,本方法具有快速、方便和敏感度高等优点,可用于PPE的临床检测。

摘要：为建立一种猪增生性肠炎(PPE)的快速诊断方法,本研究根据Gen Bank中已登录的胞内劳森菌(LI)基因组16S rDNA基因序列,设计1对引物,以疑似PPE的病料样品,通过PK-15细胞培养,分离到一株LI,建立了LI的纳米金PCR检测方法。结果表明该方法能够扩增得到与实验设计相符的202 bp(LI)的特异性片段;与大肠杆菌、沙门氏菌、流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒无交叉反应,特异性良好。与普通PCR法进行比较,该方法检测灵敏度比普通PCR高100倍。经临床检测,从50份病料样品中检出5份阳性样品,并且发现回肠粘膜和粪便中LI的检出率明显高于组织中LI的检出率。该方法可以用于LI的临床快速检测与流行病学调查。本研究为进一步研究LI的人工培养和实验室诊断PPE奠定了基础。

摘要：【目的】建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,为猪增生性肠炎的准确诊断奠定基础。【方法】针对胞内劳森菌16SrDNA序列设计引物,扩增16SrDNA,构建pT-LI-16S重组质粒。以pT-LI-16S为模板建立检测胞内劳森菌的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,检测其特异性、敏感性和重复性,并用该方法对51份疑似增生性肠炎病例进行检测。【结果】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强,与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副猪嗜血杆菌等无交叉反应;在标准质粒含量为1.0×10^2-1.0×10^8拷贝/μL时,质粒含量与循环阈值（Ct）之间具有良好的线性关系（R^2=0.992）,最小可检测到10拷贝/μL的重组质粒;重复性检测显示其批内变异系数小于2%。该方法对粪便及小肠组织中胞内劳森菌的检出率分别为46.9%和84.2%,高于普通PCR的检出率（分别为40.7%和78.9%）。【结论】建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能对胞内劳森菌进行快速检测及定量分析,可用于猪增生性肠炎的诊断。

摘要：参考GenBank发表的胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis,***）基因组16SrDNA序列,设计1对特异性引物和1条TaqMan探针,以***疫苗核酸为模板,建立*** TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。对该检测法制作了标准曲线,并进行了特异性、敏感性和重复性试验,并将其应用于猪增生性肠炎诊断。结果表明,所建立的TaqMan实时荧光定量方法特异性强,仅对含有***扩增出S型荧光曲线,而对大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌等均无扩增;该方法在1.2×10^2-1.2×10^8 copies/μL有良好的线性关系,相关系数为0.972;最低检测浓度为10copies/μL,重复性良好。对79份临床样品检测表明,该方法灵敏度高于普通PCR方法,可用于猪增生性肠炎的临床诊断。