摘要：根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。

摘要：本研究旨在建立一种荧光定量PCR检测方法,用于猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDVs)检测,同时能鉴别诊断猪瘟病毒(CSFV)。根据BVDVs与CSFV 5′-UTR保守序列,设计一套引物和特异TaqMan探针,以本实验室构建的猪源BVDVs 5′-UTR阳性重组质粒为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线。以构建的标准品为模板进行了特异性、敏感性、重复性试验、并应用于临床检测。结果显示,该方法检测CSFV、猪繁殖与呼吸综合征病毒均为阴性;最低可检测到每个反应相当于10拷贝的标准品DNA;重复性试验的批内变异系数为0.20%～0.95%;应用所建立方法对临床样品进行检测,其结果与普通RT-PCR结果的符合率为86.7%。本研究建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于猪感染BVDVs、猪瘟疫苗污染BVDVs的监测。

摘要：为了建立一种快速鉴别检测猪源牛病毒性腹泻病毒(猪源BVDV)和猪瘟病毒(CSFV)的方法,根据GenBank中猪源BVDV和CSFV 5′UTR基因序列分别设计合成特异性检测引物,经一步法双重RT-PCR反应条件的优化,建立了鉴别检测猪源BVDV和CSFV的一步法双重PCR方法。该方法对猪源BVDV、CSFV、猪源BVDV/CSFV混合物可分别扩增出185、342、185 bp和342 bp的特异性条带,检测PRRSV、PRV、PPV、PCV-2、PEDV、JEV、TGEV均为阴性,对猪源BVDV、CSFV、BVDV/CSFV混合物的RNA检测灵敏度分别达0.95 ng、0.85 ng、8.0 ng,与猪源BVDV一步法RT-PCR检测方法、CSFV一步法RT-PCR检测方法的符合率均为100%。该方法在检测94份疑似CSFV感染病料样品的临床应用中,猪源BVDV阳性率为14.89%,CSFV阳性率为24.47%,猪源BVDV/CSFV混合感染率为5.32%。表明该一步法双重RT-PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性、准确性和临床适用性,可用于临床病料样品中猪源BVDV和CSFV的快速鉴别检测,为基层兽医工作者开展猪源BVDV和CSFV的临床鉴别诊断和流行病学监测,提供了一种简单、有效的分子生物学鉴别检测方法。

摘要：根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5'端非编码区基因序列,设计合成了1对特异性引物,参考本实验室针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白设计的引物,经过PCR反应条件的优化,建立了BVDV和PRRSV双重RT-PCR的检测方法。对于PRRSV和BVDV的cDNA最低检测量分别为3.8×10-4 ng和7×10-4 ng,对于猪瘟病毒(CFSV)、脑心肌炎病毒(EMCV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的PCR扩增结果均为阴性;用该方法对江苏省不同地区采集的75份仔猪的肺脏、脾脏和淋巴结等病料进行了检测,结果PRRSV有55份阳性,BVDV有14份阳性,PRRSV和BVDV混合感染的有12份,与PRRSV和BVDV单一RT-PCR的检测结果符合率分别为89.3%和92%。证明建立的双重RT-PCR检测方法可用于临床样品中BVDV和PRRSV的检测。