摘要：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。由于该病毒介导的复杂的免疫逃避机制以及抗原性基因的异质性等特征,目前疫苗产品不能提供十分有效的保护。对于基因变异较大的流行毒株,疫苗提供的免疫保护更为有限。本文就PRRSV免疫学和免疫逃避的最新研究进展进行归纳总结,以期为PRSSV防控,新型疫苗设计等提供参考。

摘要：参照GenBank上登录的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）美洲型AF494042株ORF5基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR扩增出PRRSV河南09分离株（HN-09）的ORF5基因,经与pGEM-T Easy载体连接后,筛选出阳性重组质粒进行序列测定,并利用DNASTAR软件对序列进行分析。结果表明,扩增片段长度为721 bp,与预期目的片段大小一致,测序验证其为PRRSV的ORF5基因。序列分析表明,HN-09株与AF494042的同源性为93.5%,与山西、山东近年分离株的同源性为97.8%-99.2%,与河北、安徽、黑龙江等省分离株的同源性为93.4%-98.7%,但与2004年河南分离株的亲缘关系较远,其同源性为88.7%。用ANTHEPROT软件分析HN-09株和AF494042株编码蛋白质氨基酸的组成和二级结构的含量及分布,结果表明,HN-09株中碱基的突变,导致其氨基酸序列与美洲型有所不同,形成的二级结构略有差异,但二级结构元件的大致分布与美洲型相同。

摘要：猪繁殖与呼吸障碍综合征是目前危害我国养猪业最严重的传染病之一。本文就猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒致病机理方面的研究情况作一综述,为诊断技术、免疫机理的研究、疫苗设计和疫病防制提供借鉴。1感染猪发病机制PRRSV可以通过呼吸道、

摘要：为建立猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)TaqMan双重荧光定量PCR检测方法,研究根据Gen Bank中已登录的PRRSV-M基因序列和PCV2cap基因序列,设计了2对特异性引物和2条Taq Man探针。结果显示以含有PRRSV-M基因和PCV2-cap基因的重组质粒为模板绘制的标准曲线,其相关系数(R^(2))均大于0.99,线性关系较好。该方法仅对PRRSV和PCV2检测为阳性,而对PRV、CSFV、PEDV、TGEV检测结果均为阴性,表明其特异性较好。检测下限约为10拷贝/μL,重复性试验结果显示该方法的组内和组间变异系数均小于1.5%,利用国标荧光定量PCR方法与本实验建立的方法分别对42份临床样品进行检测,二者对PRRSV和PCV2检测的符合率分别可达96.4%和100%。研究表明所建立的荧光定量PCR方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于PRRSV和PCV2的双重定量检测。

摘要：为了建立一种可同时检测区分猪瘟病毒(CSFV),猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的寡核苷酸基因芯片方法,本研究针对每种病毒设计了4条～6条寡核苷酸探针,检测低限为1.6×104PCV-2拷贝数/μL,1.6×104CSFV拷贝数/μL,1.6×105PRRSV拷贝数/μL,比琼脂糖凝胶灵敏约10倍。利用建立的寡核苷酸基因芯片方法对76个仔猪样本进行了检测,检出了3种病毒的存在,其中25个样本(32.9%)同时感染了2种以上病毒。结果表明寡核苷酸基因芯片检测是一种快速、灵敏和高效的猪只混合感染病毒的病原学诊断方法。

摘要：根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp4、30 bp和1 015 bp目的片段。以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR。CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性。以-βactin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%。同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒。结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测。

摘要：根据GenBank已发表及笔者所在研究室分离鉴定的变异猪繁殖与呼吸综合征病毒的NSP2基因序列,设计并合成了一对引物,建立了一种鉴别PRRSV的RT-PCR检测方法。结果表明:该方法扩增变异PRRSV基因组时可获得217bp的片段,扩增普通PRRSV时则获得307bp的片段,同条件扩增猪瘟病毒(CSFV)、圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、伪狂犬病病毒(PRV)均为阴性;该体系可检测到2.6pg的PRRS病毒核酸,具有较高敏感性。对2007—2008年送检的40份临床样品进行检测,结果检出12份为变异PRRSV,其阳性率为30.0%。研究结果表明,建立的RT-PCR鉴别变异PRRSV方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等特点,适用于对猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴别诊断。

摘要：根据猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的全基因组序列,设计合成一对特异性引物,建立检测PRRSV的RT-PCR方法。对两份疑似病料进行检测,结果两份均为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒阳性。结合流行病学,临床症状以及病理解剖变化,诊断为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染。

摘要：参照GenBank中猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)基因保守序列,设计2对特异引物,通过对最佳反应条件的优化,建立了CSFV和PRRSV的二联RT-PCR检测方法,该方法可同时扩增得到2条与试验设计相符的443 bp(CSFV)和246 bp(PRRSV)特异性条带。应用该二联RT-PCR方法检测猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)结果均为阴性,证明该方法有良好的特异性。将已知阳性病毒PCR模板最高稀释倍数作为PCR的敏感度,结果表明该二联RT-PCR体系扩增的敏感度为10-3,可对CSFV和PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

摘要：为成功表达PRRSV GZJL株GP5蛋白,本研究设计合成一对引物,并以PCR方法从阳性重组质粒pMD18-T-GP5中扩增得到PRRSV GZJL株GP5基因片段中的79-600 bp即dGP5。将dGP5基因连接至原核表达载体pET-32a（＋）,并转化入表达菌株BL21（DE3）。经PCR、双酶切和测序鉴定,阳性菌株进行IPTG诱导表达,纯化的融合蛋白His-dGP5应用SDS-PAGE和Western-blotting方法进行分析,结果表明,本研究成功构建了原核表达菌株,其所表达的融合蛋白His-dGP5的分子量约为40.2 kDa且可被PRRSV阳性血清所识别。这为进一步研究PRRSV新型基因工程疫苗和诊断试剂奠定了基础。