摘要：目的针对乙肝病毒(HBV)不同亚型,建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,实现对HBV的快速检测及基因分型。方法分别设计HBV B、C、D三亚型基因组特征序列的LAMP引物,优化反应条件,建立特异灵敏的HBV亚型LAMP检测方法,并与Real-time PCR方法进行临床样本检测结果比对。结果 LAMP法在数十分钟内有效地检测出HBV的B、C、D三亚型;其中,HBV-B亚型的检出限为17拷贝;C亚型的检出限为25拷贝;D亚型的检出限为10拷贝。与Real-time PCR法相比,灵敏度提高1 000倍左右。结论 LAMP法可实现HBV的快速检测及分型,具有高特异度和高灵敏度,可用于临床检测诊断。

摘要：根据MON89034外源插入片段与植物基因组序列设计特异性引物,筛选最佳引物并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米MON89034转化体特异性LAMP检测方法。对该方法进行了特异性、灵敏度、稳定性和重复性测试。结果表明:该方法能够特异性检测出MON89034玉米;检测其灵敏度达到1 pg;以转基因玉米MON89034 DNA标准品质量分数为1.00%,0.10%,0.05%的样品为模板,其稳定性好、重复性高,假阴性率为0。本试验设计的LAMP方法适用于特异性检测转基因玉米MON89034。

摘要：建立了转基因玉米MON88017品系环介导等温扩增法检测方法。针对MON88017玉米基因组与外源基因结合处序列,设计5条特异引物,并对反应条件、特异性、灵敏度、稳定性、结果判断方法等参数进行研究,同时与实时荧光PCR检测方法进行比较,最终进行了5家同类型实验室的协同验证。结果表明本研究所建立的MON88017环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,其最低检出限为0.5%,在特异性、灵敏度和检测范围等指标上均优于传统的PCR技术,并且不依赖昂贵的大型设备,可以实现现场快速检测,检测成本与检测所需时间远低于实时荧光PCR。该方法具有快速、简便的优点,能满足实际工作要求。

摘要：目的建立快速检测人乳头瘤病毒16(HPV16)的环介导等温扩增法(LAMP)法。方法针对HPV16 E7区设计LAMP引物,建立LAMP反应体系,对其检测敏感度进行了验证,并与PCR法、LAMP加环引物法、LAMP试剂盒法进行了比较结果利用LAMP方法能成功检测到HPV16病毒E7区的基因,等温条件下反应60 min即可较好完成检测;加入环引物的LAMP法敏感度高于PCR法,与LAMP试剂盒法敏感度一致,为103稀释倍数。结论 LAMP方法具有灵敏度高,操作简便快捷,无需复杂特殊仪器的优点,适用于HPV16病毒的快速检测,具有很好的开发应用前景。

摘要：目的应用环介导等温扩增技术(LAMP)对人乳头瘤病毒18(HPV18)进行基因检测,建立一种快速、可视的HPV18核酸检测方法。方法针对HPV18病毒特异性E6区设计LAMP检测引物,通过调整反应物浓度建立LAMP反应体系,用羟基萘酚蓝(HNB)染料对产物进行可视化判定。通过检测其他不同基因型别的病毒评估引物特异性,检测倍比稀释的临床标本确定其灵敏度,通过LAMP法检测临床标本验证其与PCR法的一致性。结果利用LAMP方法检测到HPV18病毒E6引物的特异性好,恒温65℃条件下反应60 min即可较好完成检测。LAMP特异性好,灵敏度高,灵敏度为2.5×10~3拷贝/ml。LAMP可视化结果判定与PCR凝胶电泳结果相当,二者有较好的一致性(P>0.05)。结论建立了HPV18病毒的LAMP快速、可视化检测方法,该法操作简便快捷,具有很好的开发应用前景。

摘要：目的环介导等温扩增(LAMP)技术检测恶性疟原虫。方法酚氯仿法提取恶性疟原虫基因组DNA,设计四条扩增恶性疟原虫环子孢子蛋白基因的LAMP引物,以间日疟原虫、弓形虫、卡氏肺孢子虫、人全血DNA为对照,进行LAMP反应。LAMP产物经显色、电泳鉴定。将原虫血症为1.5%的恶性疟原虫血样用正常人血按1∶10倍比稀释为1.5×10-3、1.5×10-4、1.5×10-5、1.5×10-6、1.5×10-7、1.5×10-86个浓度后进行LAMP,检测其敏感性。结果恶性疟原虫检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组均呈棕色(阴性)。恶性疟原虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物。LAMP可检测恶性疟原虫的敏感度为1.5个疟原虫/107RBC。结论检测恶性疟原虫的LAMP方法特异、敏感及简便。

摘要：目的建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌(MTB)核酸的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸。用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查。结果 LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸;灵敏度高,检测限达100 fg;而实时荧光PCR检测限为1 pg。对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28%、39%和38%。结论本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法。

摘要：目的建立环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测植物蛋白饮料中大豆成分的技术方法。方法根据大豆Lectin基因保守序列,设计大豆成分环介导等温扩增检测特异性引物和反应体系,对方法特异性、灵敏度和稳定性进行测试,并以实时荧光聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)方法为参比方法,对32种植物蛋白饮料进行检测应用验证。结果本研究建立的LAMP方法特异性强,32种植物成分中除了大豆外,其他均未发生扩增,稳定性好,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为6.05%,最低检出限为0.1%(以质量分数计)。通过参比方法验证,方法特异性和灵敏度为100%,不存在假阳性和假阴性。结论本研究建立的LAMP技术快速检测植物蛋白饮料大豆成分的方法具有操作简单、快速准确、检测成本低等优点,可为植物蛋白饮料大豆成分掺杂掺假提供一种快速检测方法。

摘要：目的建立荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法用于β溶血性链球菌的快速检测。方法针对β溶血性链球菌spy1258基因设计4对特异性引物,对建立的LAMP体系优化其反应扩增条件,对该方法特异性和灵敏度评价,并将该方法和国标法分别应用于10份牛奶样品的检测。结果该方法特异性强,内外引物比为3:1,反应温度为63℃时达到最佳反应条件,检测灵敏度达100fg/μL,检出限低至9.8CFU/mL,且10种样品的LAMP法与传统国标法检测结果一致。结论本研究建立的荧光LAMP法具有快速、直观、灵敏度高和特异性强等优点,可应用于食品β溶血性链球菌的初步筛选。

摘要：目的建立一种灵敏、快速、安全、方便适合口岸现场应用的嗜肺军团菌检测方法。方法分析嗜肺军团菌基因组序列,选择特异性基因片段设计引物,建立环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LMAP)方法,并优化反应条件。结果建立的方法特异性好,灵敏度可达103cfu/ml,检测能力与荧光定量PCR法相当。结论应用环介导恒温扩增技术建立的嗜肺军团菌检测方法,灵敏度高,特异性好,适合现场快速检测。