摘要：研究设计了曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)的特异性引物和TaqMan探针,采用edna方法对东海海域44个站位的175个水层样品进行了曼氏无针乌贼的水平(44个站位)和垂直分布(175份水样)分析,并进行了曼氏无针乌贼e dna与环境变量(总深度、采样深度、温度、盐度、溶氧量、浊度、叶绿素、PO_(4)^(3-)、NH_(4)^(+))的相关性分析。结果显示,在调查海域曼氏无针乌贼的edna检出率为17.14%,在各站位间无显著差异,但在垂直分布上有显著差异(P<0.05)。在中表层水中检测到较高的曼氏无针乌贼edna浓度,在深度大于81 m的海水中未检测到曼氏无针乌贼edna。此外,曼氏无针乌贼的edna浓度(Ln([edna]+1))和存在/不存在(YNedna)受总深度、浊度、盐度、溶氧量、SiO_(3)^(-)、NO_(3)^(-)、NO_(2)^(-)等环境变量的影响。研究证明了edna是一种可靠的物种调查方法,可以作为传统资源调查的补充,为进一步研究东海海域曼氏无针乌贼的资源分布及栖息地选择提供技术支持,并为其资源修复和可持续利用提供参考依据。

摘要：利用CiteSpace文献数据可视化软件分析了环境dna技术在河流生态系统中的应用研究发文数量、发文趋势、关键词频次和突现状况;对环境dna技术在河流生态中的应用研究重点进行了综述,主要包括生物入侵和珍稀物种检测与监测、生物量估测、生物多样性检测与分析和产卵繁殖调查等,指出环境dna技术未来在河流生态系统中的应用应着重在环境dna浓度与影响因素的量化关系、公共数据库的丰富、通用引物的设计以及环境dna技术全过程标准的制定等方面。

摘要：环境dna(Environmental dna,edna)可用于监测湖泊生物多样性,该技术对湖泊生态环境破坏性小,对于开展湖泊生态保护具有重要意义。湖泊流速较为缓慢,相对于河流更容易富集dna,更适合于应用edna方法开展生物多样性研究。文章对edna在湖泊生物多样性上的应用进行了回顾,综述了其实验设计,分析了该技术存在的问题和未来发展前景。edna方法具有研究对象广,从细菌、真核微生物到高等动植物,样品类型为水和沉积物,可针对单一物种或对多个物种进行同时检测等特点。edna实验技术包括样品采集和保存、dna提取和检测。edna应用在湖泊生物多样性研究中仍面临着最佳实验方案不确定、污染、抑制反应、误差和错误及dna分类数据库不完善等问题,在未来还需要通过改进相关实验技术和发展dna数据平台去解决相应困境。

摘要：环境dna技术是一种非侵入、高灵敏、高效率且对环境无破坏性,对生物体无损伤的调查工具.为了筛选适合于蚌类环境dna生物多样性研究的宏条形码引物,本研究通过对鄱阳湖流域24种常见蚌的基因组dna进行普通扩增和高通量测序筛选了11对引物(设计了9对通用引物及从相关文献中引用了2对引物),结果显示引物cyt b和16S rRNA具有良好的扩增效果和高辨别度.进一步用环境样本(n=6)并结合传统采样技术对这2对引物进行验证,结果表明:使用引物16S rRNA共注释到蚌科物种6属8种,蚌科物种序列占总序列数的26.69%;而使用引物cyt b共注释到蚌科物种4属6种,蚌科物种序列占总序列数的6.60%.引物16S rRNA更适合用于蚌类环境dna生物多样性研究的宏条形码引物.在生物多样性监测中环境dna技术可以作为传统方法的有效补充,且同时使用多对引物,可增加可信度和检测率.

摘要：为深入了解进口亲虾携带水中物种情况,本试验设计凡纳滨对虾物种特异性引物,采用环境dna(edna)方法对境外进口亲虾携带水进行凡纳滨对虾物种鉴定,分析不同过滤膜、不同样本体积对于获取edna浓度的影响;对比不同来源水样、不同过滤膜和样品取样时间等因素对水样中凡纳滨对虾物种鉴定的影响;用宏基因组测序方法对水过滤膜edna进行测序分析。结果显示,本试验所设计的凡纳滨对虾物种特异性引物特异性好、灵敏度高,可以有效地从虾体和水中进行凡纳滨对虾物种鉴定;硝酸纤维素膜、玻璃纤维膜均有不同的过滤优势,水样品体积增加,得到的edna浓度也随之增加;虾体生存时间、样品取样时间对于宿主物种鉴定均会产生重要影响;宏基因组测序所得的对虾属序列中,凡纳滨对虾的物种序列占40%,物种丰度占比最高。结果表明,edna检测方法具有较好的灵敏性和特异性,可以作为监测水生动物携带水外来物种入侵的一个有效手段。

摘要：以18S rdna V4区作为目标基因,利用自行设计的真核微藻鉴定引物V4(F/R),结合高通量测序技术,对辽东湾2014年四季海水中真核微藻多样性进行了检测。结果发现,辽东湾海域注释到种的真核微藻有136种,41%的种类在中国海域未见报道,其中自养型占60%、异养型占10%、混合营养型占30%。研究对丰富中国海域微藻名录和外来海洋微藻背景数据库具有较大意义。

摘要：建立快速和准确的环境dna(edna)检测方法,可为鱼类的长期监测提供便利,为鱼类资源保护和管理提供技术支撑。2019年在雅鲁藏布江中游干流及拉鲁湿地和茶巴朗湿地采集了20种鱼和水样,针对拉萨裸裂尻鱼(Schizopygopsis younghusbandi younghusbandi)设计Cytb基因的特异性引物和探针,利用微滴式数字PCR(ddPCR)检测水样中e dna拷贝数,并分析其与生物量和丰度之间的相关性。结果显示,正反向引物及探针序列与其他19种鱼之间的平均错配碱基数分别为6.8、6.9和3.6,且对其基因组dna进行ddPCR扩增没有荧光信号。通过对比ddPCR和网捕2种方法,70%样点中检测结果相同,剩余30%样点都是网捕未捕获但ddPCR检出的情况。在拉鲁湿地和雅鲁藏布江干流的样点中,水样edna拷贝数与拉萨裸裂尻鱼生物量和丰度之间均具有显著的相关性,拉鲁湿地水样e dna与二者的相关系数分别为0.987和0.647,雅鲁藏布江水样edna与二者的相关系数分别为0.786和0.756,表明edna技术是鱼类分布和生物量监测的有效方法。edna检测易受到近缘物种和水体理化性质的影响。

摘要：环境dna可以定量评估水生生物丰度,但其准确性因引物与构建模式差异而有所不同。以岩礁性鱼类红鳍笛鲷(Lutjanus erythropterus)为对象,采用室内实验和实时荧光定量PCR(qPCR)的方法对红鳍笛鲷引物和探针进行设计与开发,建立dna浓度与生物量间的关系,解析环境dna(edna)持久性和衰减的过程,初步探究了edna技术对红鳍笛鲷生物量评估的可行性。结果显示,当引物退火温度为60℃时,引物扩增效果最好;红鳍笛鲷edna浓度与生物量间呈显著正相关(R^(2)=0.93);移出红鳍笛鲷后的20 d内,edna衰减浓度与时间呈显著负相关(R^(2)=0.98)。对红鳍笛鲷增殖放流前后的水环境检测结果表明,放流后水体内红鳍笛鲷edna浓度显著增加,表明本研究所设计的引物在检测红鳍笛鲷生物量方面的可行性,可为应用edna技术开展红鳍笛鲷生物量的准确评估提供理论基础。

摘要：为了快速检测致对虾急性肝胰腺坏死病的副溶血弧菌(VP_(AHPND))和肝肠胞虫(EHP)这2种病原,根据NCBI中副溶血弧菌pirAB^(VP)毒素基因和肝肠胞虫SWP1基因的保守序列设计并合成特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应条件,评估方法的特异性、灵敏度、重复性,并且把该方法应用于环境dna(edna)样品检测。结果显示所建立的双重荧光PCR方法特异性强,仅能扩增出V_(PAHPND)和EHP的阳性核酸,与对虾常见病原白斑综合征病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、十足目虹彩病毒1等均无交叉反应;VP_(AHPND)和EHP的最低检测限分别为14和1.4 copies/μL;组内和组间重复的变异系数均≤1.9%。从56批e dna样品检测结果发现,VPAHPND阳性7批(12.5%),EHP阳性4批(7.14%),其中VPAHPND-EHP双重感染2批(3.57%)。这表明基于e dna识别技术,该VPAHPND和EHP双重荧光PCR可以大大提升临床实验室的对虾疫病诊断速度,为海关等监管部门提供可靠高效的快速检测方法。

摘要：为探讨环境dna(edna)宏条形码技术在监测水生生态系统中的鱼类组成及分布的适用性,探索其在鱼类多样性研究领域中的应用潜力,采用edna技术和传统调查方法对金沙江攀枝花段的鱼类多样性进行了系统评估。结果显示:edna技术共获得526234条高质量序列,成功鉴定出3目10科43种鱼类;Simpson多样性指数变幅在0.43~0.87,平均值为0.62;Shannon多样性指数变幅在1.32~3.04,平均值为2.71;Chao1多样性指数变幅在51.22~70.56,平均值为60.30;传统调查法共计捕获鱼类386尾,分属于3目10科38种,两种调查方法检测到的鱼类相似度较高。edna技术在渔业资源监测领域中具备可行性,可为禁渔时期的水生生物多样性保护和渔业资源管理提供了新的方法。