摘要：采用ELISA技术,建立人甘露聚糖结合凝集素(MBL)与MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)结合的检测体系。设计合成一系列MBL胶原样区(CLR)的相应短肽进行抑制实验,发现MASP结合于MBL分子CLR中一个含16个氨基酸残基的区域,即成熟MBL肽链的第45～60位氨基酸残基,该区域位于Gly-X-Y三联体重复序列中Gly-Gln断裂的C端。还发现分别含1个突变残基的3种突变型(32Cys、34Asp和37Glu)MBL蛋白与MASP的结合具有类似野生型MBL蛋白的特征,但其结合能力明显降低,表明这3个突变残基位于MBL的MASP结合位点之外。

摘要：目的 构建CCT52TGT和GGA57GAA 2种甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因突变体。方法 设计2对引物52F/52R和57F/57R(R中引入了点突变),以含汉族人野生型MBL cDNA的重组质粒pGEM-mbl为模板,采用TaKaRa MutanBEST突变试剂盒进行定点突变,以PCR和测序分析进行鉴定。结果 分别用52F/52R和57F/57R为引物对进行PCR,均得到1个约3800 bp的DNA片段,自身连接后获得重组质粒。以SP6/T7P为引物对进行PCR,获得约900 bp的扩增产物。序列分析表明,2种克隆分别除其第52、57位密码变为TGT、GAA外,其余与野生型MBL cDNA完全相同。结论 构建成功CGT52TGT和GGA57GAA MBL基因突变体,为深入探索MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机理和MBL分子的结构-功能关系提供了分子模型。

摘要：目的 :在人甘露聚糖结合凝集素 (MBL)基因中引入GGC5 4GAC点突变。方法 :设计上下游引物和诱变引物 ,以汉族人野生型MBLcDNA为模板 ,采用megaprimer PCR技术进行定点突变 ,将PCR产物克隆至pGEM T载体 ,酶切和测序分析。结果 :以上游引物和诱变引物进行第一轮PCR ,获得一约 180bp的DNA片段 ,以此片段和下游引物行第二轮PCR扩增 ,得到一长约 780bp的产物 ;将其克隆至pGEM T载体 ,酶切发现第 5 4位密码中的BanI酶切位点已被破坏 ,与计算机酶切图谱分析结果一致 ;序列分析表明 ,除第 5 4位密码变为GAC外 ,余与野生型MBLcDNA完全相同。结论 :构建成功了GGC5 4GACMBL突变体 。