摘要：为研究乙醛乙醇脱氢酶基因及其在乙醇发酵生物制氢中的重要作用,采用clustalw对12个菌种的乙醛乙醇脱氢酶蛋白质序列进行多重比对分析,共得到6个保守区,以这6个保守区设计引物,共选用9对简并引物,命名为ADHJ1、ADHJ2、ADHJ3、ADHJ4、ADHJ5、ADHJ6、ADHJ7、ADHJ8、ADHJ9.用这9对引物对B49总DNA进行简并PCR,共有两对引物的扩增得到预期的结果.其PCR产物经pMD18-T克隆转化至大肠杆菌DH5α中,经筛选后测序.结果表明,这两段DNA推导的氨基酸序列与Bacillus cereus的乙醛乙醇脱氢酶基因的相似性最高为69%,证实所克隆的序列为乙醛乙醇脱氢酶基因DNA片段.尽管采用clustalw软件设计ADHJ5简并引物的简并度分别达1048576倍和98304倍,引物长度分别为30 bp和26 bp,但扩增结果特异性强.说明采用clustalw软件设计的简并引物可信度高,同时,也说明简并度不是合理评判简并引物质量的标准.