摘要：目的设计一种新型混合型生物人工肝（HBAL），通过对模拟肝衰竭血清的净化作用评价其疗效，探讨其临床应用的可行性。方法选用中国人肝细胞系-1（CL-1）作为肝细胞供体。在微重力环境下，肝细胞微载体共培养5d，细胞总量约4．0×10-9个，细胞密度约为4．0×10-7／ml。然后将其在无菌环境下灌入自制生物反应器中，制成生物部分。非生物部分采用血液灌流＋胆红素吸附。生物部分和非生物部分通过两套聚乙烯胶管构成一个封闭的环路。监测模拟肝衰竭血清中未结合胆红素（UBD）、鹅去氧胆酸（CDCD）、胆酸（CA）、血氨（AA）经过混合型生物人工肝循环后浓度的变化以及生物反应器中肝细胞功能、形态及肝细胞活性的变化。结果在整个治疗过程中，循环后24h，模拟肝衰竭血清中UBD、CDCD、CA和AA的浓度分别从（335．3±6．0）μmol／L、（395．0±5．6）μmol／L、（155．7±4．5）μmol／L、（39．0±2．6）μmol／L降至（106．0±10．9）μmol／L、（131．8±28．7）μmol／L、（42．2±7．3）μmo]／L、（3．5±1．0）μmol／L，与0h比较差异有统计学意义（P〈0．05）；24h后浓度下降趋于平稳；循环48h后，CL一1细胞功能发生变化，生物反应器中模拟肝衰竭血清中的丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）分别从（25．9±4．2）IU／L、（22．0±3．6）IU／L、（0．28±0．09）μmol／L升高至（31．0±2．6）IU／L、（31．6±8．0）IU／L、（0．41±0．12）μmol／L，与0h比较差异有统计学意义（P〈0．05）。反应器中肝细胞的数量和活力在循环48h后亦显著下降（P〈0．05）。结论（1）我们构建了一种新型灌流型生物反应器。在这种生物反应器中CL-1细胞能保持较高的活性和良好的功能。（2）新型混合生物型人肝可以显著降低模拟肝衰竭血清中的UBD、CDCD、CA、AA浓度，具有清除这些毒性物质的功能，提示其具有明显的肝功能支持作用。

摘要：目的设计一种新型混合型生物人工肝(HBAL)并通过对模拟肝衰竭血清的净化作用评价其疗效,探讨其临床应用的可行性。方法选用中国人肝细胞株-1(CL-1)作为肝细胞供体,在微重力环境下,肝细胞微载体共培养方法培养至第5天,细胞总量约4.0×109个,细胞密度约为4.0×1010/L,在无菌环境下灌入自制生物反应器中,制成生物部分,非生物部分采用血液灌流+胆红素吸附,生物部分和非生物部分通过两套聚乙烯胶管构成一个封闭的环路,监测模拟肝衰竭血清中未结合胆红素、鹅去氧胆酸,胆酸、血氨经过HBAL循环后浓度的变化以及生物反应器中肝细胞功能、形态及肝细胞活性的变化。结果整个治疗过程中循环前24h内,模拟肝衰竭血清中未结合胆红素(UBD)、鹅去氧胆酸(CDCD),胆酸(CA)和血氨(AA)的浓度分别从(335.3±6.0)、(395.0±5.6)、(155.7±4.5)、(39.0±2.6)μmol/L下降至(106.0±10.9)、(131.8±28.7)、(42.2±7.3)、(3.5±1.0)μmol/L,与0h比较差异有统计学意义(P=0.041),24h后浓度下降趋于平稳;循环48h后,CL-1细胞功能发生变化,生物反应器中模拟肝衰竭血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)分别从(25.9±4.2)IU/L、(22.0±3.6)IU/L、(0.28±0.09)μmol/L升高至(31.0±2.6)IU/L、(31.6±8.0)IU/L、(0.41±0.12)μmol/L,与0h比较差异有统计学意义(P=0.027);并且整个反应器中肝细胞的数量和活力在循环48h后也呈现显著性下降(P=0.044)。结论(1)构建了一种新型灌流型生物反应器,该生物反应器中的CL-1细胞能够保持较高的活性和良好的功能。(2)新型混合生物型人肝可以显著降低模拟肝衰竭血清中的未结合胆红素、鹅去氧胆酸,胆酸、血氨的浓度,具有清除这些毒性物质的功能,提示其具有明显的肝功能支持作用。

摘要：设计原代培养的乳猪肝细胞构建生物反应器,并观察肝细胞生长特点,进行体外灌流实验。采用改良的原位胶原酶灌流法分离乳猪肝细胞及间质细胞,在中空纤维舱的纤维外间隙中共培养,并间断旋转抑制细胞贴壁。用该生物反应器建立人工肝系统,对肝硬化病人的腹水进行体外灌流实验。结果表明,乳猪原代肝细胞平均产量为(6.29±0.37)×108细胞,肝细胞的活性为84%;在纤维外间隙内间断转动培养3 h后肝细胞聚合成球。电镜可见,多个肝细胞聚合成团生长,培养的肝细胞有功能性结合,并向组织型转化。测定中空纤维舱内连续48 h培养液尿素浓度,证实肝细胞聚合体有很好的尿素合成功能。体外灌流后,生物反应器组腹水总胆红素下降,A ST升高,与对照组相比有显著性差异。生物反应器组葡萄糖浓度下降,对照组无显著变化,两组间有显著性差异。通过本组实验,证实了我们设计的生物反应器所构成的生物型人工肝(BAL)是有效的。