摘要：植入电子起搏器可以治疗因窦房结功能失常引起的猝死等心脏疾病.但是,电子起搏器存在很多弊端,比如电池寿命有限、容易感染等.因此,生物起搏器被期待能够取代电子起搏器.为了探讨在心室内诱导心室细胞生成生物起搏器的可行性,我们首先抑制内向整流钾电流(I_(K1)),使心室肌细胞产生起搏行为,然后基于理想心室组织和真实人体心室切片数据,构建2D生物起搏器模型.基于该模型,我们研究细胞间的电偶联和起搏电流I_f对起搏器功能的影响.发现起搏电流I_f对起搏器功能有增强作用,但细胞间的弱电偶联对起搏器的起搏有更为关键的影响.

摘要：目的构建抑制大鼠心肌细胞k ir2.1基因的短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)真核表达质粒(pEGFP6-1k ir2.1),观察RNA i对大鼠心室肌细胞k ir2.1 mRNA和蛋白表达情况和搏动频率的影响。方法选择5个针对大鼠心肌细胞k ir2.1基因的RNA干扰位点,分别设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6-1k ir2.1,转染大鼠心肌细胞,转染后72 h RT-PCR和W estern-b lot检测k ir2.1 mRNA和蛋白表达情况,倒置显微镜下观察细胞的搏动情况。结果转染后72 h,实验组心肌细胞k ir2.1mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P<0.01),两对照组无明显差异。转染后72 h,实验组细胞搏动簇搏动频率较转染后48 h进一步增快,两对照组无明显变化。结论真核表达质粒pEGFP6-1k ir2.1能明显抑制大鼠心肌细胞k ir2.1基因的表达,提高大鼠心肌细胞的自律性。

摘要：目的构建抑制大鼠心肌细胞k ir2.1基因的真核表达质粒pEGFP 6-k ir2.1,观察对大鼠心肌细胞k ir2.1信使RNA(mRNA)、蛋白表达情况及搏动频率的影响。方法选择5个针对大鼠心肌细胞k ir2.1基因的RNA干扰(RNA in terference)位点,设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U 6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP 6-k ir2.1。转染大鼠心肌细胞,并将其分为3组:实验组、阴性质粒对照组和空白对照组。转染后72h,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(W estern-b lotting)检测k ir2.1mRNA和蛋白表达情况,并观察细胞搏动频率。结果转染后72h,实验组心肌细胞k ir2.1 mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P<0.01),两对照组间比较差别无统计学意义;实验组搏动频率增加,并显著高于两对照组(P<0.01),两对照组之间搏动频率差别无统计学意义。结论真核表达质粒pEGFP 6-k ir2.1能明显抑制大鼠k ir2.1基因的表达,提高大鼠心肌细胞的自律性。