摘要：以番茄细菌性溃疡病菌等7株病原细菌为检测材料,以特异性基因tom A为检测靶标,设计LAMP引物tom A-107、tom A-8和相应的环引物tom A-107LF21、tom A-107LB21。针对靶标基因进行引物筛选及引物的特异性和灵敏度测试,结果表明:tom A-107能特异性检测出番茄细菌性溃疡病菌,检测灵敏度达5×10^(2)copy/μL,环引物的加成将反应进程缩短三分之一,使整个检测过程控制在50 min内完成,该方法非常适用于Cmm菌株的现场快速检测。

摘要：根据番茄溃疡病菌ITS序列,设计并合成了PCR-DHPLC检测引物,对番茄溃疡病菌及其他病菌共10个标准菌株进行了PCR-DHPLC检测。结果表明,番茄溃疡病菌的PCR-DHPLC检测图谱出现了特异性吸收峰,而其他病菌均未在相同洗脱时间出现吸收峰,说明这种方法具有检测番茄溃疡病菌的特异性。灵敏度实验结果表明,PCR-DHPLC体系与PCR-琼脂糖凝胶电泳体系的检测灵敏度一致。研究表明,PCR-DHPLC方法是一种特异、灵敏、快速的番茄溃疡病菌检测方法。

摘要：以SYBR Green I为指示剂,建立了番茄溃疡病菌的环介导等温扩增可视化快速检测方法。根据番茄溃疡病菌特异的核糖体转录间隔区序列设计了4条引物进行LAMP扩增,通过对体系中各成分进行优化,最终确定25μL反应体系中模板200ng,MgSO4的适宜浓度为3.0mmol/L,Bst DNA聚合酶2U,dNTPs的适宜浓度为0.3mmol/L,外引物与内引物之比为1∶3时扩增效果较好,在65℃最佳反应时间为40min。在优化的体系条件下,获得的反应产物经SYBR Green I染色后,肉眼观察检测灵敏度可达到50CFU/mL,且对番茄溃疡病菌的检测具有高度的特异性。结果表明,该方法快速、准确、灵敏、特异,具有良好的实用性。

摘要：为研究中华蹄盖蕨挥发油对番茄溃疡病菌(Cmm)的抑菌效果及机理,以平板打孔法和浊度法测定中华蹄盖蕨挥发油对Cmm的抑菌效果。抑菌机理主要包括细胞壁、细胞膜和细胞周期3个方面,测定胞外碱性磷酸酶(AKP)活性以分析对细胞壁的作用,测定胞内活性氧、胞外可溶性蛋白泄漏量、细胞膜电位、ATP酶活性以分析对细胞膜的作用,最后测定细胞周期。研究发现,中华蹄盖蕨挥发油抑菌圈直径是(19.06±1.83)mm、最小抑菌浓度为0.313 mg/mL,表明中华蹄盖蕨挥发油对Cmm有明显抑制作用。中华蹄盖蕨挥发油作用后,使Cmm胞外AKP活性、活性氧水平和胞外可溶性蛋白泄漏量显著(P<0.05)升高,细胞膜电位、ATP酶活性显著(P<0.05)降低,处于DNA复制期的Cmm占比降低。中华蹄盖蕨挥发油对Cmm具有显著抑菌效果。其抑菌机理为破坏细胞壁导致胞外AKP活性升高,破坏细胞膜导致活性氧水平和可溶性蛋白泄漏量显著(P<0.05)升高,出现细胞膜去极化及ATP酶活性显著(P<0.05)降低现象,最终干扰了正常的细胞周期。

摘要：根据番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis ***,cmm)的一段特异致病基因pat-1序列,按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的cmm超分支滚环扩增技术。实验结果表明该检测技术能够从供试的10种菌中特异性地检出番茄溃疡病菌,检测灵敏度高,DNA最低检测浓度为500 fg/μL。

摘要：目的建立番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法。方法应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对番茄溃疡病菌的16SrRNA特异性基因进行扩增,采用4对引物识别目的片段的6个特异性区域,62℃恒温1h完成扩增。结果设计的引物与对照菌皱纹假单胞菌、茄假单胞菌、丁香假单胞菌番茄致病变种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。这些对照菌在茄科蔬菜上易引起类似症状。结论 LAMP检测程序便捷,所需设备简单,其结果可以通过肉眼观察来判断,比常规PCR灵敏且能更早得到反应结果,因此该技术具有更大的优势。

摘要：番茄溃疡病是一种严重危害番茄生产的细菌性病害,许多国家将其列为检疫性病害。利用ITS通用引物扩增了番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis ***)的ITS序列,并进行克隆测序。根据序列比较结果设计了引物BT1和BT2,该引物特异性好,能专一扩增出268bp电泳条带,而马铃薯环腐病菌等不同亚种、不同属的细菌及健康的番茄材料均无扩增条带。从接种但未显症番茄苗叶片及人工模拟染菌种子上提取总DNA,以此为模板均能稳定地扩增出特异性目的条带。该方法直接对种子或植株进行检测,不需进行病原菌分离培养,快速简便,适用于出入境检验检疫及种苗健康检测领域。

摘要：根据番茄溃疡病菌ITS(16S^23SrDNA间隔区)基因序列,设计并合成了荧光PCR检测引物(Fan1和Fan2)及特异性检测探针(Fanprobe),对番茄溃疡病菌和非番茄溃疡病菌的标准菌株实时荧光PCR反应。结果表明,番茄溃疡病菌PCR产物出现强烈的特异杂交信号,而非番茄溃疡病菌均未出现特异荧光信号,证明这对引物及探针具有番茄溃疡病菌鉴定特异性。将番茄溃疡病菌DNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果表明,此体系可检出52.3 fg/μL的模板。

摘要：根据番茄溃疡病菌的tomA基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,对番茄溃疡病菌和非番茄溃疡病菌的标准菌株进行了PCR扩增反应。结果,番茄溃疡病菌的PCR产物出现301bp的特异性扩增条带,而非番茄溃疡病菌均未出现扩增条带,证明这对引物具有番茄溃疡病菌鉴定特异性。将分离的番茄溃疡病菌做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度。结果表明,此体系可检出106CFU/mL番茄溃疡病菌菌液提取的模板。

摘要：本研究选取番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis ***,Cmm)致病岛上的chpC基因的部分序列,作为环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)靶标片段进行LAMP引物设计。对反应体系优化后进行特异性测定,结果表明供试的89株番茄溃疡病菌中86株检测结果为阳性,3株为阴性,供试的14株非番茄溃疡病菌(其他重要植物病原细菌)均为阴性。检测番茄溃疡病菌菌悬液样品的阈值为4.8×10~5 CFU·mL^(-1),对DNA样品的检测阈值为1.8×10^(-2) ng·μL^(-1),并据此建立了番茄溃疡病菌的LAMP检测方法。将该方法应用于番茄种子携带Cmm的检测,通过提取种子浸提液样品的总DNA,实现了对番茄种子携带Cmm的直接检测。与普通PCR相比,该方法更加快捷简便,不依赖PCR仪等昂贵的仪器设备,可以丰富现有的番茄溃疡病菌分子检测体系,为口岸等检疫部门提供简单易行的检测初筛手段。