摘要：为建立一种对猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)临床样本快速、简便的检测技术,以区分猪瘟(classical swine fever,CSF)野毒和疫苗毒感染,为规模化猪场CSF净化奠定基础。通过对GenBank中CSF野毒、疫苗毒及近源病毒的基因组全序列比对,发现CSF兔化弱毒疫苗株3′-NTR独立存在富含T的插入序列,根据这一特点分别在该插入序列的上、下两端设计2对单一RT-PCR引物并选择特异保守区域设计了二重RT-PCR引物,优化筛选能够鉴别CSF野毒与兔化弱毒疫苗的PCR反应条件,建立了能鉴别CSF野毒和疫苗毒的单一与二重RT-PCR鉴别诊断方法。敏感性和特异性分析表明,单一RT-PCR检测CSFV各引物最低核酸检测量分别为2.2pg(单一RT-PCR中的1对引物)和1.7pg(单一RT-PCR中的另外1对引物);二重RT-PCR检测CSFV各引物最低核酸检测量分别为8.2pg(CSF野毒)和6.7pg(CSF疫苗毒),两种方法均检测不到PRV、PRRSV、JEV、BVDV、PCV2的DNA/RNA。采用该方法对146份可疑临床样品进行检测,结果表明CSF疫苗毒与野毒在能繁母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪中的二重感染率分别为6.3%、7.4%、8.3%、8.6%。本研究建立的单一与二重RT-PCR方法都具有敏感性强、特异性优、重复性好的特点,该研究对规模化猪场猪瘟的净化具有十分重要的参考价值。

摘要：对GenBank中的小反刍兽疫野毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)及疫苗毒株的基因序列进行分析,设计两对引物和两条特异探针,建立小反刍兽疫病毒野毒与疫苗毒株的双重荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性检测表明,建立的双重荧光RT-PCR方法,可特异检测野毒(FAM通道)和疫苗毒(VIC通道)。灵敏度实验表明,FAM通道可检测到10^(-5)稀释度的RNA(3.576 ng/mL),VIC通道可检测到10^(-3)稀释度的RNA(27.6 ng/mL)。重复性实验表明,该双重荧光RT-PCR方法重复性较好。用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份组织样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且野毒检测结果与实验室确诊阳性结果一致,可以用于临床检测。

摘要：为快速准确检测小反刍兽疫病毒野毒和疫苗毒,建立一种特异性强、灵敏性高、经济实惠的实验室鉴别诊断方法,在同一反应体系内同时鉴别诊断小反刍兽疫野毒株和疫苗毒株用于应对该疫病诊断,使实验室检测工作更具有实效性。根据基因库中基因组序列设计2对特异性引物和探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立能够同时检测并鉴别小反刍兽疫病毒(PPRV)野毒和疫苗毒的双重荧光RT-PCR检测方法。结果表明,建立的双重荧光RT-PCR可特异性检测小反刍兽疫野毒(FAM通道)和疫苗毒(TAMRA通道);敏感性实验表明,野毒(FAM通道)可检测到10^(-3)稀释度的RNA,疫苗毒(TAMRA通道)可检测到10^(-5)稀释度的RNA;用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且检测结果与商品试剂盒检测结果一致,可用于临床检测。

摘要：根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与 PRV 的 gB、gD、gE 基因序列互补的3对引物。对样品中的 PRV DNA 模板进行了多重 PCR 扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带。

摘要：猪伪狂犬病病毒g E基因缺失疫苗已得到世界各地养殖户的普遍认可,使用范围较广。为建立一种快速区别疫苗毒和野毒的检测方法,本试验针对PRV的g E基因序列设计引物。经过各种条件的不断摸索优化,建立了一套敏感度较高、特异性较好的反应体系,适用于临床诊断、流行病学调查及科学研究,对确诊猪伪狂犬病有重要意义。

摘要：根据猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因序列保守区段,设计一对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可区分猪伪狂犬病毒野毒株与基因缺失疫苗株的PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证。结果显示,该PCR方法可扩增出388 bp的目的片段;对模板的最低检测量为1.1 pg;与猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪支原体、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪乙型脑炎病毒、猪流行性腹泻病毒无交叉反应,具有高特异性。采用建立的PCR方法对2014年以来全国不同地区81个猪场421份疑似病料进行检测,发现PRV猪场平均阳性率为35.80%,样品平均阳性率为25.42%。该方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于PRV的临床诊断和流行病学调查。

摘要：研究旨在快速有效地诊断鸡马立克氏病(MD),区分MD血清Ⅰ型病毒(MDV-Ⅰ)与疫苗毒株。试验对Gen Bank发表的140余株MDV序列进行全基因组比对,选定MDV-Ⅰ型特有的meq基因设计1对引物,通过优化退火温度等条件建立了MDV-Ⅰ的PCR诊断方法,评估该方法的特异性、灵敏度及重复性。结果显示,设定退火温度64℃、35个循环时,以MDV-Ⅰ型毒株为模板可扩增得到286 bp的片段;以CVI988或814疫苗毒株为模板时,可扩增得到463 bp的片段;该方法特异性强、灵敏度高,扩增结果稳定,可区分MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株。应用该方法诊断1例免疫后仍有MD症状的鸡,可同时扩增约286和463 bp的片段;2个片段的测序结果显示,扩增出的片段分别与MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株相匹配。研究表明,试验建立的PCR方法可快速有效地诊断MDV-Ⅰ型毒株感染鸡并筛选免疫失败的鸡群。