摘要：目的在细胞水平上探讨10-23脱氧核酶(10-23DRz)成为新型乙型肝炎基因治疗药物的可能性。方法设计合成针对乙型肝炎病毒(HBV) ayw1亚型前C/C区的2031位点的10-23DRz,并对其进行硫代磷酸化修饰,同时针对该位点设计一条未硫代化修饰的10-23DRz,经脂质体转染HepG22.2.15细胞(简称2.2.15细胞)中观察其对HBV基因表达的抑制效应。结果修饰与未修饰的10-23DRz作用于2.2.15 细胞后均可显著抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的表达,最高抑制率分别可达93.75%和90.26%,有效抑制持续时间可达96 h,修饰后的脱氧核酶在细胞内对HBsAg和HBeAg表达的抑制作用时间长于未修饰的DRz,其抑制率的最高值低于未修饰的DRz,但两者明显高于作为对照的反义脱氧寡核苷酸。对2.2.15细胞内HBV DNA复制无明显影响,未见明显的细胞毒性作用。结论经过硫代化修饰的10-23DRz和未修饰的10-23DRz在2.2.15细胞模型中能高效阻断HBV DNA的表达,是一种高度特异性的、高效的基因治疗剂。

摘要：为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。