摘要：目的了解2018-2021年淮安市病毒性腹泻病原谱及分子流行特征,为当地病毒性腹泻的防控提供科学依据。方法收集哨点医院腹泻就诊患者的粪便标本,采用荧光定量RT-PCR检测诺如病毒GⅠ/GⅡ型、轮状病毒A组/B组/C组、星状病毒及札如病毒。对GⅡ型诺如病毒核酸阳性标本进行扩增并测序,利用Lasergene软件进行序列比对及核苷酸同源性分析;利用Mega6.0软件构建系统进化树,进行系统进化分析。结果RT-PCR检测腹泻患者粪便标本GⅡ型诺如病毒阳性率为23.16%,轮状病毒阳性率为17.83%,星状病毒阳性率为4.41%,札如病毒阳性率为0.74%。诺如病毒和轮状病毒感染暴发具有明显的季节性特征,1~2岁婴幼儿感染率较高。诺如病毒优势基因型由GⅡ.4型向GⅡ.8型和GⅡ.6型转变。结论淮安市病毒性腹泻病原主要为诺如病毒和轮状病毒,感染人群以婴幼儿为主,建议根据病原学检测结果进行针对性防控。

摘要：试验旨在掌握河北省唐山市13个县(市、区)奶牛场奶犊牛病毒性腹泻病原的流行状况,有效防控奶犊牛腹泻。采集唐山市不同地区38个奶牛场腹泻犊牛粪便样品788份,提取腹泻粪便样品中的基因组RNA。根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)VP6基因、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCV)N基因序列,利用Primer Premier 5.0软件分别设计特异性引物,采用PCR方法检测粪便样品中这3种基因,利用Excel 2007对不同地区、不同季节和混合感染病原检测结果进行汇总分析。在采样范围内的788份犊牛腹泻粪便样品中,BVDV、BRV和BCV阳性检出率分别为29.82%(235/788)、29.44%(232/788)和18.02%(142/788);在所有被检地区,滦南县BVDV感染率最高,阳性检出率为45.38%(59/130),汉沽区BRV和BCV感染率最高,阳性检出率分别为55.00%(22/40)和37.50%(15/40);从采样季节来看,春季、夏季和秋季BRV感染率最高,阳性检出率分别为27.71%(46/166)、39.58%(114/288)和19.89%(39/196),冬季则以BVDV感染为主,阳性检出率为52.17%(72/138);从混合感染情况来看,以BRV+BCV二重混合感染为主,感染率为8.37%(66/788)。河北省唐山市各地区腹泻犊牛群中均存在BVDV、BRV和BCV感染,以BVDV、BRV单一感染为主。

摘要：青海省祁连县某牦牛养殖场发生以腹泻为主要特征的疾病,传播迅速,发病率为100%,初步怀疑为牦牛病毒性腹泻,为此采集了2腹泻样本,采用Trizol方法提取腹泻粪便的总RNA,利用我们设计合成的引物采用RT-PCR方法进行病原检测,结果得出这两腹泻样本均扩增出病毒性腹泻病原产物,测序结果表明该场犊牦牛腹泻由牦牛病毒性腹泻病原引起。

摘要：根据病毒基因组５＇端非翻译区（ＵＴＲ）的序列比较将牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）分成两组。种系发生分析说明ＢＶＤＶ－１和ＢＶＤＶ－Ⅱ组互有不同，根据５＇端非翻译区和编码ｐ＾１２６多肽的基因区，设计了用ＰＣＲ鉴别ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ。用该试验，１４０株ＢＶＤＶ毒株中有７６株被鉴定为ＢＶＤＶ－Ⅱ，并注意到ＢＶＤＶ－Ｉ和ＢＶＤＶ－Ⅱ之间的抗原性和病原性差别，ＢＶＤＶ－Ｉ普遍用于疫苗生产。

摘要：病毒性腹泻是我国乃至全球感染性腹泻中疾病负担较重的一大类感染性疾病。严重急性呼吸综合征(SARS)发生后,我国在病毒性腹泻防控方面建立了多种监测系统,且随着检测技术的发展,监测和防控能力大幅提升。然而,为满足国内外对病毒性腹泻防控日益增长的需求,还需要加强顶层设计和长远规划,尤其是要规范诊断和报告的疾病名称,开发多种成本-效益良好的疫苗、适合临床广泛使用的检测试剂,以现有技术优化监测系统和健康促进方式,打通部门间信息壁垒,同时提升群众参与防控的积极性和主动性。

摘要：目的建立一种可快速、全面、准确检测人感染札如病毒的Taq Man探针荧光实时RT-PCR方法。方法利用Bioedit2.0、MAGE6.0软件对可感染人的GⅠ、GⅡ、GⅣ、GⅤ基因群札如病毒进行保守序列比对,应用Primer6.0、Primer Express 3.0进行引物和Taq Man探针的设计与评价,分别设计了两套引物及Taq Man探针,克隆相应靶基因并构建阳性标准品,建立及优化一步法实时荧光RT-PCR反应体系,并进行灵敏度、特异度、临床标本验证试验。结果根据基因序列比对分析,札如病毒ORF1与ORF2连接区具有相对高保守序列,针对GⅠ、GⅡ、GⅣ及GⅤ设计了一条共用的下游引物、以及两套上游引物和Taq Man探针,能覆盖当前GenBank可见的感染人的札如病毒基因型,在同一反应管中建立了同时检测札如病毒四个基因群的实时荧光RT-PCR,并可将GⅤ与GⅠ、GⅡ、GⅣ进行初步分型,对人柯萨奇病毒、诺如病毒、轮状病毒、腺病毒等非靶标病原体无扩增,仅对札如病毒有特异扩增,最低检测下限为10拷贝/反应。结论本研究建立了札如病毒一步法实时荧光RT-PCR反应体系,可将GⅤ与GⅠ、GⅡ、GⅣ区分开来,为腹泻疫情防控和风险评估提供快速、准确的病原学依据。

摘要：目的建立一种化学发光基因芯片检测方法,实现7种腹泻病毒,A组轮状病毒、B组轮状病毒、Ⅰ型诺如病毒、Ⅱ型诺如病毒、札如病毒、星状病毒和肠道腺病毒的快速、准确检测。方法选择7种病毒特异性基因的保守区,设计引物与探针,制备寡核苷酸基因芯片。将多重实时荧光PCR(RT-PCR)扩增产物与带有特异性探针的芯片杂交,经洗涤、化学发光检测后进行结果分析。在优化的RT-PCR体系、杂交条件和化学发光检测条件下,评价芯片的灵敏度、重复性和特异性。结果研制的基因芯片具有良好的特异性和灵敏度,检测体外转录RNA参考品的最低检测限为3×103拷贝/反应,检测临床样本的灵敏度为95.2%、特异性为92.1%、符合率为95.1%。结论建立了一种基于化学发光基因芯片的腹泻病毒检测方法,此法能快速、灵敏、特异地检测和鉴别7种腹泻病毒,具有较好的应用前景。

摘要：根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株M基因设计特异性引物,建立了PDCoV纳米PCR检测方法并进行了临床样品检测。结果显示:该方法对标准品检测的最低浓度可达102copies/μL,与其他几种常见猪病病毒无交叉反应;用该方法检测国内猪场62份腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,该纳米PCR方法的检出率更高,而两种方法对268份进境活猪粪拭子样品检测均为阴性。结果表明,本研究所建立的纳米PCR检测方法适用于国内猪场的PDCoV检测和进境活猪的监控检测,可作为PDCoV实验室检测的有力技术手段。

摘要：目的了解天津市轮状病毒(RV)腹泻发病状况,以及临床及流行病学特征。方法在天津市不同区域设立5所医院,对就诊的感染性腹泻患者按设计的调查内容做现场调查、采集粪便标本,采用ELISA方法检测RV抗原,并以RT-PCR方法做型别分析。结果 1 085例患者中207例检出RV抗原,阳性率为19.08%,其中≤5岁患者的阳性率达32.20%。基因型以G3、G1及P[8]为主,分别占31.88%、17.87%和25.12%。感染存在区域间的聚集性,秋冬季高发。散居儿童患者的阳性率达31.85%。患者发病到初诊平均为(1.63±5.03)d,39.65%在发病当天就诊。RV腹泻患者每日腹泻的次数明显多于非RV腹泻患者,且多为水样便。便常规检测RV腹泻患者的白细胞数均≤10/HPF。患者的年龄、性别、饮食等卫生习惯经Logistic逐步回归分析,变量均无统计学意义。结论天津市感染性腹泻患者19.08%为RV所致,≤5岁患者更是多达32.20%,已经成为公共卫生问题。RV感染的危险因素与非RV腹泻患者类似。