摘要：全球现有疫苗种类中,病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗以其安全性和高效性而被广泛关注。VLPs是一种不含核酸的病毒蛋白衣壳,目前可根据不同需求设计目标衣壳蛋白序列并在不同的表达系统中构建生产。在疫苗设计环节,对VLPs衣壳蛋白进行合理设计和修饰,可大大增强VLPs的稳定性,尤其是提高衣壳组装过程及组装体的稳定性,间接影响VLPs的免疫原性,对提升VLPs疫苗的有效性和安全性有重要作用。近年来国内外研究表明影响VLPs衣壳组装过程的稳定性的基本因素是组装环境中的离子强度和pH值,而影响VLPs组装体稳定性及其免疫原性的主要因素有疏水性质和静电相互作用及糖基化水平等。疏水性对VLPs蛋白质结构的动态平衡和生物功能的发挥起关键作用,静电相互作用通过改变VLPs分子表面或内部的静电势能,影响VLPs衣壳内分子共价键的形成及其与外界环境的相互作用,糖基化修饰则利用自身修饰基团的生物学结构或其他功能性质影响整体VLPs颗粒的结构稳定性和免疫学功能。本文根据现阶段对VLPs的生产应用和结构的研究,综述了影响VLPs衣壳组装过程和组装体稳定性的主要因素,以及VLPs如何通过衣壳修饰来调节这些影响因素的负面影响,提升VLPs疫苗的免疫原性和有效性,从而促进未来VLPs作为疫苗平台或其他生物平台,如药物递送、基因治疗等的创新和应用。

摘要：利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统构建了含有H3N8亚型马流感病毒HA、NA和M1蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。VLPs的鉴定结果表明,3种蛋白正确组装出了类似于天然病毒粒子的形态结构,且具有血凝活性。将VLPs免疫马匹制备高免血清,分别设计小鼠先被动免疫再攻毒以及先攻毒再紧急注射免疫血清,结果证明马高免血清对H3N8亚型马流感病毒感染具有良好的预防和治疗效果,为研制H3N8亚型马流感VLP疫苗提供了理论依据。

摘要：目的制备GII.3[P12]型人源诺如病毒(human norovirus,HuNoV)广州株GZ2013-L20的病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)和多克隆抗体,系统表征其免疫原性特征和受体结合能力,为HuNoV防控提供数据支撑。方法以GZ2013-L20毒株基因组为模板,扩增ORF2并构建重组转座载体,转化至大肠埃希菌DH10Bac获得重组杆状病毒质粒Bacmid-L20-ORF2,在昆虫细胞sf9中表达目的VLP,采用透射电镜、SDS-PAGE、Western blot(WB)和受体结合实验等方法对纯化后VLP进行鉴定。此外,将VLP免疫小鼠获得多克隆抗体,通过间接ELISA和受体结合阻断试验进行评价。结果构建了重组杆状病毒Bacmid-L20-ORF2,并成功获得目的毒株VLP;透射电镜显示颗粒直径约为30 nm;SDS-PAGE和WB结果显示蛋白相对分子质量(Mr.×10^(3))约58;受体结合实验表明,目的VLP与分泌型唾液受体(A型、B型、AB型和O型)、O型非分泌型唾液受体以及猪胃黏蛋白均能有效结合;VLP多克隆抗体效价达到2×10^(5),且与20种(20/28)基因型HuNoV的衣壳蛋白具有交叉免疫反应;受体结合阻断实验显示,多克隆抗体仅对同型VLP具有中和阻断效果,而对GII.2、GII.4、GII.8和GII.17等基因型VLP没有中和作用。结论GII.3[P12]型HuNoV广州株VLP与分泌型和非分泌型唾液受体均呈现较强的结合能力,其多克隆抗体具有免疫结合广谱性,但中和阻断效果仅对同型病毒有效,其结果为疫苗研发的理性设计提供基础数据。

摘要：肠道病毒B家族是引发人类病毒性脑炎和脑膜炎的重要病原体之一.然而目前市场上尚缺乏针对此类病毒的特异性疫苗.病毒样颗粒具有保留病毒真实结构特点、不含病毒核酸、不具备病毒复制与感染能力的特征,为开发有效、稳定且安全的新型疫苗提供了理想方案,特别是针对无囊膜的肠道病毒.本研究中,基于昆虫细胞表达系统,经密度梯度离心等方法获得埃可病毒16(E16)型的病毒样颗粒(virus-like particle;VLP).借助冷冻电镜单颗粒技术,成功将该病毒VLP解析到原子分辨率(2.8?),结构分析显示:与同源病毒E30的结构相类似,E16-VLP具备肠道病毒所特有的能够引起机体产生特异性中和免疫反应的重要结构特征,具有较大的疫苗开发价值.本实验室建立的方法在抗肠道病毒B家族通用疫苗的设计与开发上具有巨大潜力.

摘要：病毒样颗粒（ VLPs）是由一种或多种病毒结构蛋白组装成的颗粒，具有与病毒颗粒相似的外部结构和抗原性，但不含病毒基因。可采用酵母、哺乳动物细胞、植物细胞、昆虫细胞和细菌系统表达VLPs抗原。 VLPs作为疫苗，可有效诱导机体产生免疫反应。可以作为其他佐剂、多肽疫苗的整合平台设计嵌合体疫苗。本文就病毒样颗粒国内外研究进展及其在传染病防控中的应用前景进行综述。

摘要：合适的标准品对实时荧光定量PCR(qPCR)检测高致病性H5N1禽流感病毒(avain influenza virus,AIV)十分重要.本研究将H5N1AIV HA基因的部分序列插入到能够表达MS2噬菌体病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)DNA序列的表达载体上,诱导表达后得到了包裹有H5N1AIV HA基因RNA片段的VLP.该VLP能够耐受核酶的消化,形态与MS2噬菌体病毒颗粒形态相同.利用表达的VLP作为阳性标准品及设计的特异性荧光探针、淬灭链,使用优化的qPCR反应体系,得到qPCR检测H5N1亚型AIV的阳性对照标准曲线.研究结果为高致病性H5N1亚型AIV的准确定量检测提供了基础.

摘要：癌症作为人类健康的头号杀手,在全球被广泛研究.病毒样颗粒是由多个病毒的一种或几种结构蛋白组装而成的颗粒,不含病毒核酸,不能进行自主复制,具有与病毒类似的整体结构.通过化学和基因工程的方法对病毒样颗粒中所含的蛋白进行功能化修饰,可使其成为一种具有众多应用前景的体系.病毒样颗粒作为一种强有力的免疫激活剂,同时兼具纳米颗粒尺寸的优势,被广泛应用于肿瘤治疗中药物递送载体和疫苗的设计.本文对病毒样颗粒在上述两个领域的最新研究进展进行综述,旨在为病毒样颗粒在肿瘤治疗及相关的药物研发等提供参考.

摘要：为建立对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H-PRRSV)快速准确的检测方法,本试验构建兽医临床用病毒样颗粒内标表达载体,制备检测H-PRRSV的病毒样颗粒内标。在H-PRRSV Nsp2基因保守区域设计了1对特异性引物和1个TaqMan荧光探针,通过对反应体系和扩增条件的优化,建立了检测H-PRRSV的荧光定量RT-PCR检测方法;将MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白基因序列定向插入pET-32a载体的相应位置,在载体下游插入人工合成包含引物和探针的内标基因序列,采用双酶切和PCR鉴定阳性质粒,将阳性质粒转化大肠杆菌BL21工程菌,IPTG诱导表达,制备了病毒样颗粒内标。试验结果表明,所建立的方法特异性强,灵敏度高,对8份已知病毒的检测结果显示特异性为100%,检测滴度为1TCID50/mL病毒液,对42份临床样本的检测结果与农业部备案试剂盒检测结果完全一致,体现了较好的实用性。

摘要：病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)在形态结构上类似于病毒,但不含病毒基因组。依据来源可分为源于病毒VLPs和人工VLPs。前者主要通过基因工程制备,后者由人工化学合成而来。VLPs的表面组分可进行灵活多样的修饰改造以满足不同需求;在适宜条件下VLPs可以包裹核酸或其它小分子物质。作为分子运载工具,VLPs可靶向性地递送基因、药物或其它小分子物质。VLPs具有独特的免疫学特性,不但能通过影响APC发挥佐剂效应,还可以作为其它佐剂、肽疫苗和核酸疫苗的整合平台设计多种形式的疫苗。VLPs在载体和疫苗设计中具有良好的应用前景。

摘要：寻找有效的疫苗来治疗肿瘤和微生物感染性疾病一直是人们追求的目标。近年来,基于乙型肝炎病毒核心抗原的颗粒疫苗在该领域取得了一些新的进展。本文就这些新的进展作一综述。