摘要：病毒样颗粒(Virus-like Particles,VLPs)为不含病毒基因组的空壳或包膜状颗粒结构,与天然病毒颗粒结构相似。VLPs技术在病毒的组装与形态多样性等基础研究中发挥了重要作用。VLPs作为疫苗,可有效诱导机体产生免疫反应。VLPs具有独特的免疫学特性,不但能通过影响抗原递呈细胞发挥佐剂效应,还可以作为其它佐剂、多肽疫苗和核酸疫苗的整合平台设计多种形式的疫苗。在适宜条件下,VLPs可以包裹核酸或其它小分子物质,因此可以作为分子运载工具靶向性地递送基因或药物。VLPs还可以替代天然病毒在免疫学检测中发挥重要作用。

摘要：目的:构建并表达含有A(H1N1)流感病毒NP基因片段并可抗RNase降解的病毒样颗粒,作为RT-PCR检测的阳性对照。方法:设计带有NcoⅠ、BamHⅠ酶切位点的引物克隆MS2噬菌体的装配蛋白和包膜蛋白基因,化学合成含BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的A(H1N1)流感病毒NP基因片段,将这些基因连接到质粒载体pET-28b(+)上,转化到***21(DE3)感受态细胞中进行表达,表达产物进行纯化,然后进行RNase攻击试验和稳定性试验。结果:获得含NP基因片段的病毒样颗粒,可抵抗RNase降解,并能在37℃稳定保存30d。结论:该病毒颗粒稳定、安全、可靠,可作为A(H1N1)流感病毒RT-PCR检测、定量分析的有效阳性参考品。

摘要：目的设计构建登革-日本脑炎嵌合蛋白表达载体,制备嵌合病毒样颗粒。方法 根据登革病毒样颗粒的形成机制及日本脑炎病毒中和性抗原表位的分布,设计并构建登革-日本脑炎嵌合蛋白表达载体,转染BHK-21细胞,筛选能表达目标蛋白的G418抗性克隆,收集细胞培养上清,纯化病毒样颗粒,用Western-blot和电镜检测病毒样颗粒的形成。结果用RT-PCR扩增、酶切和连接等分子生物学方法成功构建了序列及阅读框均正确的重组表达质粒pCI-SMEJ-14#;将该质粒转染BHK-21细胞,经0.6 g/LG418筛选获得4个能表达目标嵌合蛋白的克隆,从培养的细胞上清中能纯化出直径30~100 nm的病毒样颗粒。结论 所设计的登革-日本脑炎病毒嵌合蛋白能在BHK-21细胞中产生病毒样颗粒,为制备新一代登革-日本脑炎嵌合型疫苗奠定了良好基础。

摘要：病毒样颗粒是指利用异源宿主系统表达的病毒,结构蛋白自行组装成不含病毒基因组、不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒。病毒样颗粒具备构象逼真、安全、稳定、可刺激体液和细胞免疫应答、作为载体表达其他抗原以及可设计成区分自然感染与免疫接种等诸多优点。有研究表明,新城疫病毒样颗粒可用来研制针对新城疫流行变异株的高效疫苗。作者就新城疫病毒样颗粒相关研究进展进行较为详尽的综述,以期为中国新城疫病毒样颗粒疫苗的研究提供参考。

摘要：目的了解嵌合型病毒样颗粒(c VLP)疫苗在防治疾病等方面的研究进展,并探讨其药学研发思路。方法介绍常用病毒样颗粒(VLP)载体,总结cVLP疫苗在防治肿瘤和慢性疾病方面的应用,并从c VLP疫苗的构建与设计、VLP载体与免疫表位的连接方式、结构确证研究三方面开展c VLP疫苗的药学研究。结果与结论 cVLP作为改良型VLP,除构建自我组装VLP针对同源病毒的疫苗外,将VLP作为递呈载体还可呈现除载体外的其他病毒或肿瘤相关抗原表位,实现对多种病毒或肿瘤抗原的共同免疫。且c VLP作为一种技术平台,还可在预防病毒及治疗肿瘤和过敏性疾病中发挥重要作用。

摘要：重组病毒样颗粒是病毒衣壳蛋白外源表达的重要形式,形态结构与天然病毒高度相似,位于纳米尺度的大小易于被免疫系统识别,可激发机体产生保护性免疫反应,且不含有病毒基因,因此,是一种理想的疫苗形式,也是基于结构进行疫苗设计的重要结构载体。目前已上市的乙型肝炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和戊型肝炎疫苗等基因工程疫苗均采用病毒样颗粒形式。大肠杆菌表达系统被广泛用于基因工程药物的生产,具有安全性好、生产周期短、易于放大生产等优点,在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。本文综述了利用大肠杆菌研制戊型肝炎疫苗和人乳头瘤病毒疫苗的进展,特别是这些病毒样颗粒疫苗的表达及组装、表位结构特征和临床试验结果。

摘要：当设计流感疫苗时,有一个远期目标——即设计一个具有广泛交叉反应性的疫苗,它能对任何流感病毒株引起的流感提供有效的控制。本文总结了不同的重组蛋白HBc/4M2e所固有的免疫原性和保护性能力的研究结果。

摘要：目的：原核表达并纯化含β-淀粉样肽（β-amyloid peptide，Aβ）氨基段15肽（Aβ1-15）和删除c／el表位的截断型HBcAg的融合蛋白，观察其形成的病毒样颗粒，检测其免疫原性，为阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）基因工程疫苗的研究提供基础。方法：将合成的Aβ1-15基因连接于HBcAg的1-71的3’端，再将HBcAg的88～144位氨基酸的基因片断连接于Aβ1-15；的基因的3’端，构建重组质粒pUC／c—Aβ1-15将重组基因亚克隆于原核表达载体pET-28a（＋）中，构建表达质粒pET／c．Aβ1-15异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（isopropyl β—D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）诱导、SDS—PAGE和考马斯亮蓝染色检测重组基因的表达。表达的融合蛋白（命名为CAl5C）纯化后，透射电镜观察病毒样颗粒的形成。以病毒颗粒抗原CA15C腹腔注射免疫昆明小鼠，间接ELISA法检测小鼠血清中抗-Aβ抗体的滴度。结果：经酶切鉴定、DNA序列测定证实，目的基因重组于表达质粒之中，与理论设计相符。诱导表达后，在细菌裂解液的上清和沉淀中均可见表达蛋白CA15C，以沉淀中为多，约占细菌沉淀总蛋白的40％。电镜下可见纯化后的CA15C形成直径约30nm的病毒样颗粒。昆明小鼠经CA15C免疫5次后，其血清中抗-AB抗体的滴度可达1：10000，且检测不到抗-HBc抗体。结论：原核表达制备的含Aβ1。和HBcAg的融合蛋白CA15C，可形成病毒样颗粒，有较强的免疫原性。

摘要：目的:构建含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)及删除了c/e1表位的截短型HBcAg基因的原核表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白C-ABCSP-Aβ15-C形成的病毒样颗粒,检测其免疫原性,为多表位AD基因工程疫苗的研究奠定基础。方法:PCR扩增含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)的基因,连接于HBcAg的1～71的3'端,再将HBcAg的88～144位氨基酸的基因片断连接于Aβ1-15的基因的3'端,构建重组质粒pUC/c-ABCSP-Aβ15-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,IPTG诱导表达。用SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色,观察重组基因的表达。透射电镜观察融合蛋白形成的病毒样颗粒。融合蛋白经腹腔注射免疫昆明小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗-ABCSP、抗-Aβ抗体的滴度。结果:经酶切鉴定、DNA序列测定证实,重组基因位于表达质粒之中,其大小、序列与理论设计相符。诱导表达后,SDS-PAGE显示,在细菌裂解液的上清和沉淀中均可见到表达蛋白条带,且以沉淀中为多,约占沉淀总蛋白的40%。纯化后的融合蛋白形成电镜下可观察到的病毒样颗粒。昆明小鼠经融合蛋白免疫5次后,其血清中抗-ABCSP抗体的滴度可达1∶5 000,抗-Aβ抗体的滴度可达1∶10 000,检测不到抗-HBc抗体。结论:c-ABCSP-Aβ15-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性。

摘要：为构建一种能够用于开发猪细小病毒病毒样颗粒疫苗的猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒。根据GeneBank数据库中的猪细小病毒全基因组序列设计并合成了1对能扩增VP2基因的引物,采用PCR扩增猪细小病毒BJ-2株的VP2基因,并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,获得阳性质粒pFastBac-PPVVP2;测序后将该质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得含有VP2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2;最后将获得的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2转染Sf9昆虫细胞,并成功拯救了能稳定表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒Bacmid-PPV VP2。结果发现,该重组病毒可用于稳定表达猪细小病毒VP2蛋白,并且表达的VP2蛋白可在体外自我组装形成病毒样颗粒,电镜观测其颗粒大小与猪细小病毒全病毒大小类似,且形成的病毒样颗粒与全病毒一样具有豚鼠红细胞凝集作用,凝集效价可达1∶2048。故构建的表达猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒为研制猪细小病毒的基因工程亚单位疫苗奠定了基础。